| 供货周期： | 现货 |
| 品牌： | 抚生 |
| 规格： | 1 X 106cells/T25或1 mL冻存管 |
| 货号： | AXB9756 |
| CAS号： |
商品属性：
产品名称 | MDA-MB-435(乳腺癌细胞) | 组织来源 | 乳腺；乳房；导管；导管癌；胸腺渗出液 |
种属 | 人 | 货号 | AXB9756 |
冻存条件 | 无血清冻存液，液氮储存 | 细胞形态 | 纺锤形细胞样 |
英文名称 | MDAMB435:MDA-MB-435 | 生长特性 | 贴壁生长 |
细胞详情：
MDA-MB-435(乳腺癌细胞)细胞别称；MDA-MB-435s; MDA-MB-435 S; MDA-MB-435-S; MDAMB435S; BrCL15
种属来源；人
年龄性别；女；31岁
组织来源；乳腺；乳房；导管；导管癌；胸腺渗出液
生长特性；贴壁生长
细胞形态；纺锤形细胞样
细胞代数；10代以内
背景介绍；MDA-MB-435S细胞是一种纺锤形的细胞，1976年由其亲本MDA-MB-435细胞中筛选得到。MDA-MB-435细胞是从31岁的转移性乳腺导管腺癌女性患者胸水中分离得到。当用荧光染料对微管蛋白进行染色时，亲本细胞显现散布特征(Ⅱ型)。最近通过cDNA阵列研究表明，亲本(MDA-MB-435细胞)可归入黑素瘤起源。但近来证明MDA-MB-435细胞被M14黑色素瘤细胞污染。
STR位点；Amelogenin：X；CSF1PO：11；D13S317：12；D16S539：13；D18S51：13，17；D19S433：14；D21S11：30；D2S1338：19，24；D3S1358：14，20；D5S818：11，12；D7S820：8，10；D8S1179：13；FGA：21；TH01：6，7；TPOX：8，11；vWA：16，18
生物安全等级；1
细胞规格；1x106cells/T25或1mL冻存管
支原体检测；无
保藏机构；ATCC; HTB-129；中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心
培养基；90%DMEM+10%FBS
培养条件；气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件；无血清冻存液，液氮储存
细胞处理：
1） 冻存细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
细胞系操作步骤：
(1) 细胞系培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃ CO2培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。
(2) 转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)
A液：用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。
B液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。
分别将A液与B液轻弹混匀，静置5分钟。
(3) 吸取B液加入至A液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。
(4) 转染准备：用1mL不含血清培养液漂洗两次，再加入4mL不含血清培养液。
(5) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。
(6) 瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA，验证敲减/过表达效率。
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