ELISA试剂盒总需求时间来保温，是因为ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，参与板孔中的标本，其间的抗原并不是都有对等的和固相抗结合的机遇，只需最靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐渐平衡的进程，因此需经涣散才干抵达反应的结尾。
在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的结束需求有必定的温度和时间，这一保温进程称为温育，有人称之为孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。
保温的办法除有的ELISA试剂盒仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度灵敏平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性出色的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，最终将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规矩的温度，特别是在气温较低的时分更应如此。
无论是水浴仍是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能灵敏平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严峻约束在规矩的范围内，标准室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求操控温育。室温温育时，ELISA试剂盒只需平置于操作台上即可。应留心温育的温度和时间应按规矩力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板一同测定。
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