做实验最怕什么?早起抢仪器？熬夜写报告？......都不是。这些是家常便饭，最怕的是辛辛苦苦做了很久的实验，才发现做出来的效果不满意，这个时候我们就需要学习一套标准的实验流程了。
IHC(免疫组化)、ELISA(酶联免疫吸附试验)、WB (免疫印迹)，是免疫学三大常用工具，分别用于定位，定性和定量。 利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其键结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定量分析。 1、操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度(保持在18 C~25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，要先查看水育箱温度，是否符合要求。 2、正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂，避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要清洗干净，避免污染，加样次序要与说明书一致，否则可导致结果错误，实验重复性差。 3、手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数，洗液在反应孔内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孔间窜流，造成孔问污染，导致假阴性或假阳性。 4、要保证加液量一致 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。 5、显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。 6、试剂的影响因数:应选用有国家批准文号，质量靠得住的产品，不能图便宜，忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内，在使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂开启后要在一周内用完，剩余的试剂下次用时应先检查是否变质，，显色剂如被污染变色将造成全部显色，导致错误结果。过期的试剂不宜再用，若别无选择，应做好双份质控品的监测，确保结果的可靠性。 加终止液后3分钟内读数
可能原因 建议 阴性对照孔被阳性对照或样品污染 洗涤时， 勿将洗液溢出孔外 抗体非特异性结合 封闭液不适合，更换封闭液 酶结合物过浓 请检查酶结合物是否按说明书规定稀释 孵育温度过高 检查孵育箱的温度是否正确、稳定 底物在使用前曝光 应保存在暗处，避光 读板前停留时间过长 可能原因 建议 标准瓶溶液配置有误 确认是否进行正确稀释 标准品复溶不当 开盖前进行离心；检查复溶是否存在不溶物 标准品已降解 按推荐方式保存和处理标准品 曲线的标度不合适 尝试使用不同标度绘制曲线，例如双对数、5参数拟合 移液器加样误差 正确使用经过校准的移液器 可能原因 建议 样本中无检测物或检测物含量极低 设置内参， 重新实验 样本中其他物质影响/掩盖检测 作适当稀释，降低其他物质的干扰，或作系列稀释,检测回收率 样本中检测物浓度过高，Hook效应导致假低值 适当倍数稀释样本,检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内 可能原因 建议 样本未置于室温 实验开始前，将样本平衡至室温 酶结合物活性减弱 检测稀释度 酶活性收到抑制如叠氮钠 避免实验不当的防腐剂 显色温度不适当 按说明书操作
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