小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

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小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒的实验操作程序总结:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解)；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合ELISA试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制)，酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后立即进行检测。

ELISA试剂盒的实验操作程序总结

1.准备试剂，样品和标准品

2.加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

3.洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

4.洗板5次，加入显色液A、B，37℃反应10分钟

5.加入终止液

6.15分钟之内度OD值

7.计算

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