小鼠10kDa热休克蛋白1(HSP10)检测试剂盒

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品牌: eBioscience
规格: 96t/48t
货号: HZB501Mu
CAS号:
上海沪震生物科技有限公司
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小鼠10kDa热休克蛋白1(HSP10)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:

(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。

(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH9.09.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4 1824小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.11.010μg/ml)进行包被后,在其它试验条件相同时,小鼠10kDa热休克蛋白1(HSP10)检测试剂盒观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为110μg/ml

(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(OPD)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMBABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。

实验原理

小鼠10kDa热休克蛋白1(HSP10)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中

TLR水平。用纯化的抗体包被微孔

板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入

TLR抗原、生物素化的抗人

TLR抗体、HRP

标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下

转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制

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