【阿拉丁】Caspase免疫荧光染色方案

上海阿拉丁生化科技股份有限公司

Caspase免疫荧光染色方案

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细胞凋亡是一种受严格调控的细胞死亡机制，其核心是半胱天冬酶（Caspase）的激活。免疫荧光染色是一种有效的技术，可以同时检测细胞样本中的半胱天冬酶和其他凋亡相关蛋白。

该实验方案用于一般性指南。对于具体的实验，需要根据所用样品和抗体进行优化。

常规流程

所需材料

-针对caspase的一抗，例如重组Caspase-3抗体，兔抗（Ab093013）

-准备好样本并固定在载玻片上

- Triton X-100

- PBS

-封闭缓冲液（PBS/0.1％Tween 20 + 5％血清）

-结合二抗，例如山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor® 488）（Ab138205）

-封固剂

-加湿室

实验步骤

1.将固定的样品在PBS/0.1% Triton X-100中室温孵育5分钟，进行透膜处理。

2.用PBS清洗三次，每次在室温下放置5分钟。

3.吸干载玻片并加入200 μL封闭缓冲液（PBS/0.1% Tween 20 + 5%血清）。

3.1将载玻片平放在加湿室中并在室温下孵育1-2小时。

3.2然后用PBS冲洗一次。

注意：我们建议使用来自二抗宿主物种（或密切相关物种）的血清，例如，如果使用山羊抗兔结合物，则在封闭缓冲液中使用山羊血清。

4.加入100 μL在封闭缓冲液中以1:200稀释的一抗。然后将载玻片放在加湿箱中，在4°C下孵育过夜。

提示：您可以准备不含一抗的载玻片作为阴性对照。

5.第二天，室温下用 PBS/0.1% Tween 20 清洗载玻片三次，每次10分钟。

6.吸干载玻片并加入100 μL适当的二抗（在PBS中按1:500稀释）。

6.1将载玻片平放在加湿室中，避光，室温下孵育1-2小时。

6.2用PBS/0.1% Tween 20 清洗三次，每次5分钟，避光。

7.沥干液体，将载玻片封固在永久性或水性封固剂中，并用荧光显微镜观察。

应用

1）细胞凋亡研究：研究细胞凋亡过程中caspases的激活状态，了解细胞死亡的分子机制。

2）药物筛选和毒性测试：评估药物或化合物对细胞凋亡的影响，并筛选诱导或抑制细胞凋亡活性的候选药物。

3）细胞信号转导研究：研究细胞信号通路影响caspases的活化及细胞凋亡的过程。

4）发育生物学：研究caspases在胚胎发育和组织形态发生过程中程序性细胞死亡中的作用。

5）免疫学研究：研究caspases在T细胞、B细胞等免疫细胞中对免疫反应的调控作用。

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