人β-细胞素检测试剂盒

人β-细胞素检测试剂盒

货号：KLC001.48

96T

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

人β-细胞素检测试剂盒 预期应用

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中β-细胞素含量。

 试剂盒内容

 需自备的设备及试剂

1.       450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)

2.       单道或多道微量加液器及吸头

3.       稀释样品的EP管

4.       蒸馏水或去离子水

5.       吸水纸

6.       盛放洗液的容器

 试剂盒的储存及有效期

1.       未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。

2.       使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。

注意：

试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后 1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

人β-细胞素检测试剂盒 标本的采集与保存

1.       血清：

将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4^oC 过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20^oC 或-80^oC 保存，但应避免反复冻融。

2.       血浆：

用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8^oC 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20^oC 或-80^oC 保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：

1） 取适量组织块，于预冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，称重后备用（组织块较大需先剪碎后再匀浆）；

2） 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨，该过程需在冰上进行（有条件实验室可选用机器匀浆）；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融 进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2 次）。

3） 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟，留取上清即可检测。

4. 细胞裂解液：

1）贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞（悬浮细胞可直接离心收集）；

2）将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次；

3）物理方法裂解细胞（可先超声破碎细胞，再反复冻融）：

i 超声破碎：取适量PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂。

ii 反复冻融：将待破碎的细胞在-20 ^oC 以下冰冻，室温融解，反复3 次，使细胞溶胀破碎。

4）将标本于2-8 ^oC 1500×g 离心10 分钟，收集上清备用。

5. 细胞培养上清或其它生物标本：

请 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20^oC 或-80^oC 保存，但应避免反复冻融。

注意：

1.      以上标本均需密封保存，4^oC保存应小于1周，-20^oC不应超过1个月，-80^oC不应超过2个月。

2.       标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。

3.       实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。

 试剂准备

1.       使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。

2.       标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000pg/ml。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入500μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释，标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

    Stock      

     Standard

3.       检测溶液A及检测溶液B：Detection A 及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液A或B1:100稀释(如：10μL检测溶液A/990μL检测稀释液A)，充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μL/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2mL。

4.       浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。

5.       底物溶液：请用灭菌的移液器吸头吸取所需体积的TMB至另一干净容器中使用，容器中剩余的底物应予丢弃，不要倒回TMB瓶中。

注意：

1、 标准品的稀释不能直接在板中进行。

2、 标准品请于临用前15分钟内配制。该标准品只能使用一次。

3、 标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请使用相应的稀释液配制，不能混淆。混匀时要轻轻充分混匀，避免起泡。为保证实验结果的准确请使用微量吸管，并校准微量加液器。请依据所需的量精确配制，尽量不要微量配制(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μL)，以避免造成浓度误差。

4、 请勿重复使用已经稀释过的标准品、检测溶液A工作液和检测溶液B工作液。

5、 浓洗涤液中如有结晶析出，请先温育至室温，轻轻混匀，至到结晶完全溶解再进行配制。

6、 试剂盒中部分试剂为储存液，客户需配置成工作液后使用，在配置过程中如因纯净水质量差或水质污染，以及实验中所用耗材洁净度差，可能造成实验结果不准确，甚至完全错误，请使用双蒸水。

人β-细胞素检测试剂盒 标本处理

1.       本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

2.       实验前应预测标本含量，如果标本浓度过高，应对标本进行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

3.       若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。

4.       使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致  ELISA实验结果偏差。

5.       若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素 较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。

6.       某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。

7.       建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。

 操作步骤

1.       加样：分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。设标准孔7孔，依次加入100μL不同浓度的标准品(见试剂准备2)。空白孔加100μL(见试剂准备第二步最后一管)，余孔加待测样品100μL，酶标板加上覆膜，37^oC温育2小时。

2.       弃去液体，甩?%B