供货周期: | 现货 |
品牌: | LMAI Bio |
规格: | 50μg 100μg |
货号: | ICA484Hu01 |
CAS号: |
RCVRN蛋白;恢复蛋白(RCVRN)重组蛋白
英文名称:Recombinant Recoverin (RCVRN)
RCV1; Cancer-associated retinopathy protein
来源:原核表达
宿主:E.coli
规格:10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)具体详见说明书
片段与标签:Gly2~Ala200 (Accession # P35243) with N-terminal His Tag
物种来源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猕猴、山羊、绵羊、马、牛、猪、鸡、狗等其他物种多物种)相同的名称,不同的物种。
RCVRN蛋白;恢复蛋白(RCVRN)重组蛋白性状:冻干粉
表达系统: 大肠杆菌
产品纯度:>95%-98%(SDS-PAGE & RP-HPLC)
保存条件:如果样品在2-4周内使用,可以在4°C低温储存。
长期储存,建议添加载体蛋白(0.1%HSA或BSA),并储存在-20~ -80°C。避免多次冻融。
RCVRN蛋白;恢复蛋白(RCVRN)重组蛋白
蛋白重组表达策略组合
重组蛋白的表达往往不像理论那样一帆风顺,在实际的表达过程中有可能产生各种各样的问题。在选择一个的蛋白表达策略非常困难的情况下,那么采用看似笨拙的方法,有可能会成为一种意想不到的“成功捷径”,比如项目要求构建表达两种重组蛋白时,构建6种不同的表达质粒,意味着有36种不同的表达条件组合,通过高通量微量蛋白表达实验一次性就可获得蛋白表达条件组合,后续中式飞行试验和成本控制会变得相对容易。
蛋白原核重组表达服务具体流程
RCVRN蛋白;恢复蛋白(RCVRN)重组蛋白融合标签选择:
亲和标签:蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用:一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易;另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类:一类是短肽类标签;一类是长肽以融合蛋白(fused partner)形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析。
不同的系统步骤稍微有些不同的,大致步骤如下:
真核表达系统的重组蛋白表达步骤:
a. 选择表达载体和宿主细胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表达载体的构建
c. 无内毒素的质粒抽提
d. 细胞瞬时转染
e. 表达小试,条件优化
f. 表达分析和鉴定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表达
h. 亲和纯化
i. 检测和鉴定
原核表达系统的重组蛋白表达步骤:
a. 选择表达载体
b. 密码子优化
c. 基因合成/亚克隆
d. 转化表达菌株
e. 蛋白表达小试分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白亲和纯化
g. 如果蛋白不可溶,则需要变复性来制备可溶蛋白。
h. 鉴定,包括SDS-PAGE和WB鉴定
RCVRN蛋白;恢复蛋白(RCVRN)重组蛋白表达蛋白的分析、纯化、检测
诱导表达成功后,表达蛋白的分析、纯化、检测应该顺当,按一般的实验步骤做没太大的问题。
虽然,在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少高级修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工,常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象等缺点,但原核表达具有的操作简单、快捷,需时较短,表达产量高,适合工业化等优点,仍是我们合成外源蛋白的选择。原核表达的全过程有许多不确定因素,所以每完成一步都得检验结果是否正确,当实验遇到困难时如何进行分析,找到问题的症结是我们实验的关键。
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