供货周期: | 现货 |
品牌: | LMAI Bio |
规格: | 48T |
货号: | LM031142M |
CAS号: |
哈维氏弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
哈维氏弧菌核酸检测试剂盒(一管式 PCR-荧光探针法)
◆ 产品说明
动物病害检测系列可针对食品、动物组织等样品中病原的特异核酸片段进行扩增,通过实时扩增
曲线判定结果。本产品用于对哈维氏弧菌的检测,检出限为 10
3copies/μL 寄生虫基因组 DNA。
◆ 产品组成(96 测试)
试剂 含量
A-VH-P 20μL × 8 管× 12 排
NG-P 100μL × 3 支
PG-VH-P 100μL × 2 支
◆ 适用仪器
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。
◆ 自备耗材和仪器
①冰盒;②移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;③离心机;④涡旋混匀器;⑤金属
浴;⑥均质机、搅拌机或研钵等研磨器具;⑦电子天平。
◆ 注意事项
1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
1)一区:样本制备区。
2)第二区:模板添加区。
3)第三区:扩增及产物分析区。
★ 分区之间好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
2.实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30
秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
◆ 样品处理
参照下述方法处理样品。
一. 直接检测
1. 病灶组织
(1)若对样本不增菌直接进行检测,则取患病动物的病灶组织做匀浆备用。
2. 水体
(1)取 10~100mL 养殖水,用筛网过滤,取滤液通过 0.22um 的**纤维膜过滤;
(2)将滤膜剪碎振荡重悬于 500 μL 0.9% NaCl 水溶液或无菌生理盐水,12000 rpm 离心 5 min,尽量弃净上清
液。
二. 增菌检测
取待检样品 25g(mL),加入 225mL 的 TYE 液体培养基,用旋转刀片式均质器以 8000r/min 均质 1 min,
或者拍击式均质器拍击 2 min,制备成 1:10 的均匀稀释液。如无均质器,则将样品放入无菌乳钵或均质袋中磨碎,
再加入 10mL TYE 液体培养基,于摇床培养 24h。
SM-031142LⅡ-A01
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详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
◆ 实验操作
1.模板制备(样本制备区)
请参照水生动物病害基因组 DNA 快速提取试剂盒说明书的提取步骤。
2.添加模板(模板添加区,放置于冰盒上进行)
剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管,放置在室温待解冻后,离心 30 秒后揭开封口膜,向每管反应液
中分别加入 5μL 模板,顺序为 NG、待测样品模板、PG-VH-P。盖好配套的 PCR 管盖后,涡旋混匀 30s,离心 1min,
立即进行 PCR 扩增反应。
3. 扩增反应(扩增及产物分析区)
使用荧光定量 PCR 仪,荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 TAMRA。
按下列条件设置扩增反应:
PCR 循环 荧光收集位点
95℃ 10 分钟 1 个循环 —
95℃ 15 秒
40 个循环
—
60℃ 1 分钟 ※
其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
◆ 结果判定
检测样品无 Ct 值或≥40,曲线为直线或轻微斜线,无“S”型扩增曲线,可报告样品阴性,不含有哈维氏弧菌或
含量低于检出限;
检测样品 Ct≤36,曲线呈“S”型扩增曲线,可直接报告样品阳性,含有哈维氏弧菌;
检测样品 36<ct≤40,需进行一次重复实验,若 ct="" 值仍处于="" 36="" 和="" 40="" 之间且呈“s”型扩增曲线,同时阴性对照<="" p="">
无 Ct 值,报告样品阳性,否则报告样品阴性。
★ NG 反应为平滑直线,PG 反应为“S”型扩增曲线,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持
人员联系。
参考结果图
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