供货周期: | 现货 |
品牌: | LMAI Bio |
规格: | 5ug质粒 |
货号: | LM2205 |
CAS号: |
pSingle-tTS-shRNA 载体
质粒类型: | RNAi载体 |
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克隆方法: | 多克隆位点,限制性内切酶 |
载体大小: | 6990 bp |
3' 测序引物: | Sing-Tet-U6-R: (4999–4967): 5'-GAAGC GGAAG AGCGC CCAAT ACGCA AACCG CCT-3' |
载体抗性: | Ampicillin (氨苄青霉素) |
筛选标记: | Neomycin (新霉素) |
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
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LM2205 | pSingle-tTS-shRNA | 5ug质粒 | 1350 |
The pSingle-tTS-shRNA vector expresses the tetracyline-controlled transcriptional suppressor (tTS), which controls expression of an shRNA sequence inserted into the shRNA cloning site. The tTS protein is a fusion of the Tet repressor protein (TetR) and the KRAB-AB silencing domain of the Kid-1 protein (SDKid-1 ), a powerful transcriptional suppressor (1, 2). In the absence of the inducer doxycycline (Dox, a tetracycline derivative), tTS binds to the tetO sequences in the modified Tet-responsive Pol III hybrid promoter (P Tight/U6 ) and blocks expression of the shRNA. As Dox is added to the culture medium, tTS dissociates from P Tight/U6 to allow Pol IIImediated transcription of the shRNA, resulting in suppression of the target gene in a highly dose-dependent manner. pSingle-tTS-shRNA also contains a ColE1 origin of replication and an ampicillin resistance gene (Amp r ) for propagation and selection in bacteria, as well as a neomycin resistance gene (Neo r ) for selection of stable transformants in mammalian cells.
After digesting pSingle-tTS-shRNA with HindIIIand XhoI, clone an annealed ds oligonucleotide encoding your desired shRNA sequence into the vector. Transfect the recombinant vector into cells and select stable, clonal tranformants with G418 to obtain a cell line capable of induced suppression of the shRNA's target gene.
pSingle-tTS-shRNA 载体原理机制
载体效应实验 用牛血清白蛋白耦联二硝基苯 (BSA-DNP) 和卵白蛋白耦联二硝基苯 (OA-DNP) 制备载体—半抗原,观察载体在抗体产生中的作用。首先以 BSA - DNP 对小鼠进行初次免疫,然后分别用 BSA - DNP 和 OA - DNP 进行再次免疫,观察载体对抗 DNP 抗体产生的影响。结果发现,只有当初次和再次免疫时,半抗原耦联在相同的载体上才能产生抗半抗原抗体的再次应答。此作用被称为载体效应。载体效应实验证明了载体不是单纯起运载半抗原的作用,而是具有载体特异性。因此揭示了一个完全抗原分子,必须具有pSingle-tTS-shRNA 载体决定基和半抗原决定基。并进一步证明了在抗体形成过程中存在有对载体特异性反应细胞,即 T 淋巴细胞为载体的反应细胞,对抗体产生起辅助作用;也存在对半抗原特异性反应细胞,即 B 淋巴细胞。
实验组 初次免疫 再次免疫 抗DNP抗体
1 BSA-DNP BSA-DNP +++
2 BSA-DNP OA-DNP +
3 BSA-DNP+OA OA-DNP +++
抗体的特异性来自于B细胞膜表面Ig受体对抗原的特异性识别,以致B细胞只能和其特异性识别的抗原结合并进行加工处理。但是作为T细胞依赖性抗原(Td-Ag),被B细胞或巨噬细胞加工后,只剩下一些MHC-Ⅱ类分子结合的抗原寡肽段被呈递给Th细胞,以产生反馈性的活化该特异性B细胞克隆的信号,并使B细胞分化成抗体分泌细胞。 [1]
在一个完整的大抗原分子上与Ab结合的表位和与MHC-TCR结合的序列可能不同,与抗体结合的表位相当于半抗原部分与MHC-TCR结合序列相当于半抗原载体部分。从而显示出在Td-Ag中半抗原与载体效应发生的分子基础。
同样的半抗原与不同的载体偶联结合都可以产生相应Ab,但其辅助T细胞可以不用。特异性的抗体产生后,可引起一系列的免疫效应。
在免疫应答中,B细胞识别半抗原,并提呈载体表位给CD4阳性T细胞;Th细胞识别载体表位。故通过载体把特异的T-B细胞之间连接起来,T细胞才能激活B细胞,使B细胞分泌抗体。这就是载体效应。
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