产品详情
T4 Quick Ligation Mix
产品概述
本产品是一种即用型2 × 预混液,内含Rapid T4 DNA Ligase、专属连接增强剂和经过优化的缓冲液,该设计简化了建立反应所需的步骤。该预混液可完成DNA粘性末端、平末端或单碱基突出末端的连接反应。用本试剂盒能使大多数连接反应在25℃条件下5 min即可达到反应终点。此外,即使当DNA量少且浓度低时仍可进行克隆连接,为用户节省宝贵的DNA样品,且无需稀释直接转化到多种化学感受态大肠杆菌。
产品内容组分 | LM004A | LM004B |
T4 Quick Ligation Mix | 250 μL | 500 μL |
产品优势
快速:5 min即可完成连接反应。
兼容性强:可连接粘性末端、平末端、单碱基突出末端、Linker以及Adapter。
方便快捷:2×预混液包装,减少加样次数,使得克隆更为高效。
实验案例1.T/A 5 min快速连接
以购买的pMD18-T载体、Taq DNA聚合酶的PCR扩增产物(500 bp)为T/A连接的底物;用T4 Quick Ligation Mix进行25℃,5 min快速连接后,转化到DH5α感受态细胞,培养12-16 h后,平板菌落生长状况如图1所示,随机挑取15颗单克隆用载体通用引物进行菌落PCR,后进行琼脂糖凝胶检测,如图2所示,分析上述结果可得,T4 Quick Ligation Mix对T/A连接具有优异的连接效率。
2. 粘性末端5 min快速连接
以EcoRΙ、XbalΙ进行双酶切后回收得到的pET-28a载体及基因片段(2kb)作为粘性末端连接底物,用T4 Quick Ligation Mix进行25℃,5min快速连接后,转化到DH5α感受态细胞,培养12-16h后,平板菌落生长状况如图3所示,随机挑取15颗单克隆用载体通用引物进行菌落PCR,后进行琼脂糖凝胶检测,如图4所示,分析上述结果可得,T4 Quick Ligation Mix对粘性末端的连接具有优异连接效及阳性率。
3. T/A及平末端快速连接
以pT7BlueT载体及插入片段(1.0 kb)作为T/A连接底物, 以平末端pUC19载体及基因片段(0.5 kb)作为平末端连接底物用从A、B公司购入的同类产品、T4 Quick Ligation Mix进行25℃,5 min快速连接,后转化到DH5α感受态细胞,在含有X-Gal、IPTG、Amp的L-琼脂平板上培养,形成单菌落,并进行菌落计数并计算转化效率。从结果中可看出T4 Quick Ligation Mix具有较高的转化效率及连接效率。
应用范围
粘性末端连接、T/A克隆、平末端连接、dsDNA切刻修复。
产品存储
-20℃保存
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