供货周期: | 现货 |
品牌: | LMAI Bio |
规格: | 50次 |
货号: | LM-F089 |
CAS号: |
柱式软体动物DNAout
产品及特点 本产品是专门用于从各种软体动物组织中提取基因组 DNA 的试剂盒。其原理是基于阳离子去垢剂 CTAB 在适当的离子强度条件下,特异地跟基因组 DNA 结合形成沉淀,然后在用硅胶膜技术进行进一步纯化。本产品具有下列特点:
1. 适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物动物,包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。
2. 提取到的基因组 DNA 完整性,其中最长可以到达长度一般在 20-50kb。
3. DNA 纯净,OD260/280 一般都在 1.9 左右、DNA 片段大小在 30-50 Kb 左右,可直接用于 PCR、酶切、杂交等。
4. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装
柱式软体动物溶液 A 101111a 50 mL 柱式软体动物溶液 B 101111b 15 mL(棕色) 柱式软体动物溶液 C 101111c 50 mL 蛋白酶 K 溶液(20 mg/mL) 80911 1 mL 离心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脱液 2.0 111205 10 mL 使用手册 101111sc 1 份
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。蛋白酶 K 溶液需要低温运输和-20℃保存。
自备试剂 氯仿。
使用方法
1. 匀浆方法一:称取 0.1-0.3g 软体动物组织,转移到塑料研钵中,液氮研磨成粉后转移到一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中。注意:最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵,因为 DNA 会吸附在表面,影响得率。在离心管中加入 1 mL 溶液A 并用移液枪头充分吹打混匀。进入第三步。
2. 匀浆方法二:将 0.1-0.3g 软体动物组织剪成小块,转移到 10-15mL 塑料管中(培养细菌那种离心管即可),加入 1 mL,用 Polytron 式匀浆机(剪切式匀浆机)匀浆 1 分钟左右。
3. 在样品中加入 20 uL 蛋白酶 K 溶液(20mg/mL),37℃保温 1-3 小时。注意:最好让反应体系处于摇晃状态,此保温长度一般可以让样品彻底溶化。
4. 加入 0.3 mL 的溶液 B 和 0.2 mL 的自备氯仿,振荡器上振荡 30 秒充分混匀。
5. 12,000 rpm 室温离心 3 分钟,小心将上清转移到新的 1.5 mL 塑料离心管中。
6. 在上清液中加入等体积的溶液 C,上下颠倒 30 秒充分混匀。
7. 将混合液分两次转移到离心吸附柱中。每次是先将 0.7-0.8 mL 混合液转移到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟,12,000rpm 室温 1 分钟,弃穿透液。再把剩余的一半上柱,重复此操作。
8. 将 0.7 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中,12,000 rpm 室温离心半分钟,弃穿透液。
9. 将 0.3 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中,12,000 rpm 离心半分钟(此步为第二次洗涤,一般可以省略)。
10. 空甩离心吸附柱半分钟去除残留液体。
11. 将离心吸附柱放置在一新的 1.5 mL 塑料离心管中,加入 30uL DNA 洗脱液3.0。
12. 12,000 rpm 离心 1 分钟,管底即为 DNA 溶液,可立即用于浓度测定或 PCR,也可长期保存在-20℃。
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