供货周期: | 现货 |
品牌: | LMAI Bio |
规格: | 50次 |
货号: | LM-F111 |
CAS号: |
柱式细菌DNAout
产品及特点
本产品是在基因在天净沙细菌 DNAOUT 基础上开发的柱式升级产品,可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组 DNA 的快速提取。
1. 操作简单,整个过程不到 20 分钟。
2. 产率一般在 5-20 ug/mL 过液培养的饱和菌液(108-109个细胞)。
3. OD260/280 一般在 1.8 以上,可直接用于 PCR、酶切、杂交等实验。
4. DNA 片段长度一般在 40-50 Kb 左右。
5. 每次提取可以处理 0.1-1.5 mL 的细菌,也可以使用菌落。
6. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。
7. 安全无毒,本试剂盒对人体无害,无腐蚀性和刺激性气味。
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装
溶菌酶干粉 100406 600 mg 溶液 A 60802A 15 mL 溶液 B 60802B 7.5 mL 溶液 C 60802C 30 mL 离心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脱液 2.0 111205 10 mL 使用手册 60802sc 1 份
运输及保存 常温运输及保存(溶菌酶干粉需要 4℃或-20℃保存),有效期一年。
自备试剂 氯仿、自备无菌水。
使用方法注意:溶液 A 和溶液 B 容易产生沉淀,溶液 B 十分粘稠,均需要放置在 65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低,用前充分摇匀。
一: 对革氏阴性细菌样品, 不需用溶菌酶
1. 将 0.1-1.5 mL 过夜培养的菌液转移到 1.5 mL 塑料离心管中, 12,000 rpm室温离心 1 分钟沉淀细菌,弃上清。
2. 加入 300 uL 预热的溶液 A 到细菌沉淀中,充分吹打均匀。
3. 再加入 150 uL 预热的溶液 B 到离心管中,颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液 B 比较粘稠,可以采取称量方法取用,150uL 约等于 150-160 mg。也可以将 1 mL 枪头剪去一截再吸取。
4. 65℃放置 3-5 分钟。如果室温放置,DNA 产量会降低 10-20%。
5. 加入 200 uL 自备氯仿,震荡混匀 10-30 秒,此时溶液将呈乳白色。
6. 12,000 rpm 室温离心 2 分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的 1.5 mL 塑料离心管中,避免触及中间层的白膜。
7. 加入 1.5 倍体积(约 0. 7 mL)的溶液 C,颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中,室温放置至少 2 分钟。
8. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,DNA 将吸附在离心吸附柱的膜上,倒弃收集管中的穿透液。
9. 将 0.5 mL 通用洗柱液加入离心柱中,12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃穿透液。
10. 重复上步操作一次。
11. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的 1.5 mL 离心管中。
12. 加 50-100 uL 通用洗脱液,室温放置 3-5 分钟。
13. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟即得 DNA 溶液。
14. 由于本产品使用的离心吸附柱吸附 DNA 的能力较强,可以重复上步操作一次以便得到更多的 DNA。
15. 直接取 5-10 uL 电泳检测 DNA,其余放冰箱备用。
二: 对革氏阳性细菌样品,需用溶菌酶
1. 将 0.1-1.5 mL 过夜培养的革氏阳性细菌 12,000 rpm 室温离心 1 分钟后, 重悬于 0.6 mL 溶菌液中(溶菌液配制:30 mL 无菌水+600 mg 溶菌酶,配制后好分装成小管并放-20℃长期保存,每次只用一小管),颠倒混匀 5-10 次后放 37℃保温至少 30 分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间,需要自己根据不同的细菌摸索)。
2. 12,000 rpm 室温离心 10 分钟,小心弃上清。
3. 后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第 2 步。
三: 其他注意事项
1. 可以直接使用细菌菌落提取 DNA,操作时直接将细菌菌落挑入到溶液 A 中,后续操作同上。
2. 从单个菌落中提取到的 DNA 较少,所以只用 30 uL 通用洗脱液洗脱。
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