供货周期: | 现货 |
品牌: | LMAI Bio |
规格: | 400次 |
货号: | LM-F273 |
CAS号: |
免DNA提取PCR试剂盒(PCR直扩试剂盒)
产品及特点本产品是可以直接用新鲜的动物、植物、细菌样品的裂解液进行 PCR 扩增的试剂盒,它具有下列特点:
1. 操作简单,免去 DNA 提取、蛋白去除、RNA 去除等步骤,15 分钟即得用于 PCR的模板,一个实验员每天可以筛选上千个样品,尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。
2. 兼容性广,可以用于几乎所有的分子生物学样品,包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和 FTA 卡)、石蜡组织切片等。
3. 成本低廉,从提取到 PCR 处理每个样品的成本才一元左右,在大模筛选时能节约成本。
4. 环保健康,不使用任何有毒有害的试剂。
5. 本试剂盒足够处理 400 份样品,足够 400 次 20uL 体系的 PCR。
规格及成分 成 份 编 号 十孔盒包装
免提 PCR 溶液 A 成分一 LM130985a 400 μL(白色盖)
免提 PCR 溶液 A 成分二 LM130985b 800 μL(绿色盖)
免提 PCR 溶液 B LM130985c 1 mL×4(红色盖)
PCR MagicMix 3.0,2× 90805 1 mL×4(黄色盖)
使用手册 130985sc 1 份
运输及保存 低温运输,溶液 A 成分一和成分二、溶液 B 可以常温放置,PCR MagicMix 3.0 需要-20℃保存。有效期一年。
自备试剂 PCR 引物和模板,超纯水
使用方法1. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例:在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水,充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置,但好在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
2. 根据材料不同参考下表取少量样品到一干净的塑料离心管中。
样品种类 取用量
动物组织 1-5 mg
鼠尾 2mm 长
血液样品 不超过 20 uL
植物叶片 1-5 mg
植物种子(去皮) 1-5 mg
酵母培养物 0.2-0.5mL 培养物沉淀
细菌培养物 0.2-0.5mL 培养物沉淀
注意:未列出样品,用户需要自己摸索最佳用量。对富含多醌多酚的植物材料(如棉花),
组织使用量最好不要超过 0.5mg。
3. 加入 100 uL 溶液 A 工作液,确保样品被溶液淹埋。
4. 95℃保温 10 分钟。
5. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得细胞裂解液。
6. 直接用裂解液作为模板设置 30 uL 体系的 PCR 反应体系如下:
成分 用量
PCR MagicMix 3.0 10 uL
细胞裂解液(来于上步) 1-2 uL
自备 PCR 引物 1(10uM) 1 uL
自备 PCR 引物 2(10uM) 1 uL
补水到 20 uL
注意:裂解液体积最好不要超过 PCR 体积的 1/10。
7. 放入 PCR 仪中进行 PCR,PCR 参数需要根据引物 Tm 值和靶分子长度等参数设
置。一般不低于 35 次循环。
8. PCR 结束后取 5-10 uL 直接上样电泳(本产品不需要上样液即可直接上样),红色染料电泳速度相当于 50 bp DNA 片段。
9. 如果没有预期的扩增,细胞裂解液中可能是有 PCR 抑制剂(植物、土壤和血液等DNA 样品常含此类抑制物),建议把细胞裂解液分别稀释 10 倍和 100 倍再用 3uL进行 PCR 扩增。也可以在 PCR 体系中加入 1/10 的本公司的 PCR 抑制物清除剂(CAT#:60804,30uL 体系中加 3uL。需要另购),可能会对 PCR 有帮助。
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