供货周期: | 现货 |
品牌: | LMAI Bio |
规格: | 50次 |
货号: | LM-F322 |
CAS号: |
加T试剂盒
产品及特点某些 DNA 聚合酶具有不依赖于模板的末端转移酶活性,在只有 dTTP 存在的情况下,可以在平末端的 DNA 片段的两个 3’端各加上一个 dT 尾巴。本产品就是利用此原理开放的加 T 试剂盒,主要用于制备 T 载体或在平末端的 DNA 片段上加上 1 个 T 尾巴。
本产品具有下列特点:
1. 简单, 2X 加 T 预混合液中含有所需要的所有成分(包括酶)),不需要单独准备。
2. 各成分佳用量经过优化,用户不需要单独调试。
3. 适用于任何平末端的 DNA 片段,包括 Pfu DNA 聚合酶等高保真 DNA 聚合酶合成的 DNA 片段或限制性内切酶酶切回收得到的 DNA 片段。
4. 加 T 后的载体可以作为 T 载体使用。
规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装
2 X 加 T 预混液 LM60106a 1.25 mL(绿盖)
使用手册 LM60106sc 1 份
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。
自备试剂 平末端 DNA 片段、平末端质粒 DNA、自备超纯水。
使用方法 一:反应前纯化处理:
1. 平末端 DNA 片段或平末端质粒 DNA 可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化,后溶解在水或 TE 中,终浓度以0.1 ug/uL 为宜。必须注意的是, 用 Vent, Deep Vent, Pfu,Pwo 等具有 3 到 5 外切活性的 DNA 聚合酶扩增得到的 DNA片段,必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/氯仿抽提或 Proteinase K 处理),否则它们将在加 T 反应时,将切除掉加上的 T 尾巴,干扰反应。
2. 本产品的加尾酶在 DNA 的 3’末端的核苷酸为 T 时,加 T 效率更高,故如果有可能,好满足此要求。
二:加 T 反应
3. 在干净的 0.5 mL 或 1.5 mL 离心管中,分别加入回收的 DNA20190124dx片段(0.2-2 ug)、25 uL 2 X 加 T 缓冲液、后补水到 50 uL,在 PCR 仪上 72℃保温 2 小时。如果用金属浴或水浴,必须加50uL 石蜡油,否则水分在反应过程中将蒸发,影响加尾效率。
4. 加 T 反应后,加尾酶将与 DNA 末端紧密结合,所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用 Proteinase K 处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的 DNA 溶于适量水和 TE 中后即可用于后续连接反应。由于加一个 T 不会改变 DNA 片段的琼脂糖电泳速度,故不能通过跑电泳检测加尾效果。
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