供货周期: | 现货 |
品牌: | LMAI Bio |
规格: | 0.1mL*10 |
货号: | LM-F351 |
CAS号: |
大肠杆菌HB101化学感受态细胞
产品及特点HB101 菌株是 E.coli K12 菌株与 E.coli B 菌株的杂合产物(同时也是 Stbl3 的 原始菌株)。recA13 突变可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率; 但不含核酸酶 endA1 突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂 盒中去蛋白液。hsdS20 背景使 HB101 缺失内切酶系统,增强了外源 DNA 的稳定性 和提取质量。本产品是采用大肠杆菌 HB101 特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于 DNA 的化学转化。本产品具有以下特点:
1. 具有链霉素抗性。
2. 基因型:F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR) glnV44λ-。
3. 不存在 lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。
4. 该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验。
规格及成分 成分 编号 小扁盒包装
本产品 81221 0.1 mL×10
使用手册 81221sc 1 份
运输及保存 干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等
使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 μL,可以 根据实际情况分装使用。 以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞处于冰水混合状态时,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(根据实 际情况加入适量的 DNA,通常 100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴 25 分钟。
3. 42℃热击 45 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置 2-3 分钟,晃动会降低转 化效率。
4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基(不含抗生素),混匀后置 于 37℃摇床,200 rpm 振荡培养 60 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含有相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃倒置培养 12-16 小时。
注意事项:
1. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
2. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布 平板;若转化的 DNA 总量较少,可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计 的克隆数较少,可通过离心(5,000 rpm,1 分钟)收菌后吸除部分培养液,悬浮 菌体后将其涂布于平板中。
3. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培 养。
4. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液 再涂布新培养基进行培养。
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