供货周期: | 现货 |
品牌: | LMAI Bio |
规格: | 0.1mL*10 |
货号: | LM-F355 |
CAS号: |
大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞
产品及特点本产品是采用大肠杆菌 Origami B (DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可 用于 DNA 的化学转化。使用 pUC19 质粒检测本产品,转化效率可达 107。本感受态细胞 具有卡那霉素和四环素抗性。
菌株基因型为:F -ompT hsdSB(rB - mB - ) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR ,TetR )
规格及成分 成分 编号 包装
本产品 120520 0.1 mL×10
使用手册 1 份
运输及保存 干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等
使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL,可以根据 实际情况分装使用。 以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(根据实际情况加入适量 的 DNA,通常 100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和),用移液器 轻轻吹打混匀,冰浴 30 分钟。
3. 42℃热击 45 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置 2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于 37℃ 摇床,150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的 SOC 或 LB 固体 琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃直至液体被吸收, 倒置培养,37℃培养 12-16 小时。
注意:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板; 若转化的 DNA 总量较少,可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较 少,可通过离心(4,000 rpm,2 分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于 平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再 涂布新培养基进行培养。
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