供货周期: | 现货 |
品牌: | LMAI Bio |
规格: | 30次 |
货号: | LM-F474 |
CAS号: |
一站式SDS-PAGE蛋白电泳套装
产品及特点SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主 要方法,但是单独配制各种溶液十分繁琐,为此基因开发了本产品。它具 有下列特点:
1. 一站式,即开即用,用户不需单独准备各种成分,十分方便。
2. 安全,将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到低。
3. 灵活,分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺便于配制各种比例和浓度 的 SDS-PAGE,满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装保存温度
丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺
干粉(19:1)分子80810a250mL 棕色玻璃(60 g/3g)RT
分离胶缓冲液,4× 分子100868 200 mL RT
浓缩胶缓冲液,4×(含染料) 分子100867 100 mL RT
TEMED 100880 1.5 mL 4℃
过硫酸铵(干粉) 100879 1 g RT
SDS-PAGE 上样液,5× 81204 1 套(1 mL) -20℃
SDS-PAGE 电泳液(干粉) 81203 1 套(20 L) RT
使用手册 80810sc 1 份 RT
运输及保存 常温运输和保存,但TEMED和5×SDS-PAGE上样液需低温运输,分别在4℃ 和-20℃有效期一年。 自备试剂 去离子水
使用方法
1. 一次使用本产品时需先配制 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液(30% AB 溶液,下同):在本产品提供的装有 60 克丙烯酰胺/3g 甲叉双丙烯酰胺干粉的瓶中加入 146 mL 自备的去离子水,充分摇晃 10-20 分
钟即得 200 mL 30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液(以下简称30%AB 溶液)。丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例在 19:1 时,PAGE 胶的孔径最小,分辨率高。配好的 30%AB溶液好 4℃避光保存并在1月
内用完。
2. 根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度,参考下表:蛋白质大小范围(kD) 佳浓缩胶浓度 佳分离胶浓度
15-45 4% 15%
15-60 4% 12.5%
18-75 4% 10%
30-120 4% 7.5%
60-200 不需要 5%
注:如果上样体积少于 10uL,可以不需要浓缩胶。
3. 配制 10%的 APS(过硫酸铵):称 0.1 克过 APS 干粉到 1 mL 去离子水中,摇晃溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可以在 4℃存放一周。4. 配制分离胶:在一个 25 mL 的三角瓶中,先按下表的用量加入水、30%的 AB 溶液和 4×分离胶缓冲液。以下是配制 10 mL 胶的用量,更大体积则各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神经毒性,一定要戴手套操
作。
分离胶
浓度
用量(单位:mL)
水 30%AB 溶液 4×分离胶配胶液
5% 5.83 1.67 2.50
6% 5.50 2.00 2.50
7% 5.17 2.33 2.50
7.5% 5.00 2.50 2.50
8% 4.83 2.67 2.50
9% 4.50 3.00 2.50
10% 4.17 3.33 2.50
11% 3.83 3.67 2.50
12% 3.50 4.00 2.50
13% 3.17 4.33 2.50
14% 2.83 4.67 2.50
15% 2.50 5.00 2.50
16% 2.17 5.33 2.50
5. 配制浓缩胶(一般使用 4%的浓度):在一个 25 mL 的三角瓶中,先按下表的用量加入水、30%AB溶液和 4×浓缩胶缓冲液。以下是配制 10 mL
4%浓缩胶的用量,丙烯酰胺溶液具有神经毒性,一定要戴手套操作。
浓缩胶
浓度
用量(单位:mL)
水 30%AB 溶液
4×浓缩胶缓冲液
(含蓝色染料)
4% 6.17 1.33 2.50
6. 将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀,抽真空 10-15 分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应,不去除将影响丙烯酰胺聚合反应)。
7. 分别加入 50 uL 10%APS 和 30-50 uL TEMED(这是配制 10 mL 分离胶和浓缩胶的用量,更大体积的胶则用量需按比例增加),迅速摇匀。
8. 先灌分离胶,在胶的液面距离顶部 1.5 cm 的时候,停止灌胶。
9. 由于分离胶比重较大,可以立即在上面灌浓缩胶,但灌注时必须小心,不要破坏分离胶和浓缩胶的液面,在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶,插入梳子,室温聚合 30-60 分钟。如果不能做到小心灌浓缩胶,则必须待分离胶室温聚合 30-60 分钟后再灌制。
10. 拔出梳子,用 1×SDS-PAGE 电泳液冲洗加样孔。
11. 将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽加入足够的 1×SDS-PAGE 电泳液。本产品提供 20 升的 SDS-PAGE 电泳液干粉,将所有干粉溶解在 2L 水中即得 10×SDS-PAGE 电泳液(测 pH 应该在 8.3,如果不是 8.3请用 NaOH 或 HCl 调到 8.3),用时再稀释成 1×工作液。
12. 在蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液(4uL样品中加1uL上样液),100℃煮沸 3-5 分钟。短暂离心,取上清上样。
13. 先用 10 mA 的电流电泳(对 0.75 mm 厚×14 cm×14 cm 的胶)直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
14. 将电流增加到 15 mA,直到染料进入分离胶底部时终止电泳,取出凝胶进行后续的实验处理。
4. 使用改良的浓缩胶缓冲液,由于其含有染料,制备的浓缩胶呈蓝色,便 于上样时识别加样孔。
5. 电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验
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