| 供货周期： | 现货 |
| 品牌： | LMAI Bio |
| 规格： | 250U |
| 货号： | LM3602A |
| CAS号： |
3173 DNA Polymerase
| 3173 DNA Polymerase为来源于病毒的热稳定型DNA聚合酶，通过点突变修饰，使其3’-5’外切活性缺失（exo-形式）而获得更佳的扩增活性。该酶除了具有依赖于DNA的聚合酶活性，还具有依赖于RNA的逆转录活性，因此可用于单管RT-PCR扩增。该酶具有强烈的链置换活性，可用于DNA或RNA的等温扩增。在以RNA为模板的LAMP实验中，可实现单酶系统反应。对于有复杂二级结构的RNA模板，可通过92度加热3s来得到好的扩增效果，而Bst pol在此温度加热后导致扩增活性丧失。 3173 DNA 聚合酶在95°C条件下的半衰期为20min，因此PCR的起始预变性时间通常为1~2min。该酶搭配两种Buffer：10×3173 Isothermal Buffer和5×Best PCR Buffer。10×3173 Isothermal Buffer用于恒温PCR扩增，其反应温度不能超过70°C。 5×Best PCR Buffer用于常规PCR扩增，94°C预变性时间不可超过5min。 | ||
主要特征 | ||
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组分 | ||
| 组分名称数量3173 DNA Polymerase (5 U/μl)50 μl/500 μl10×3173 Isothermal Buffer1 ml/5 ml5×Best PCR Buffer1 ml/5 ml | ||
单位定义 | ||
| 一个活力单位即在65°C条件下，30分钟内催化25nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。 | ||
应用 | ||
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储存 | ||
| -20℃可保存3年。 | ||
使用方法 | ||
| 1.以DNA为模板进行PCR扩增反应体系配制3173 DNA Polymerase (5 U/μl) 1 μl5×Best PCR Buffer 10 μldNTP Mixture (2.5 mM each) 4 μl模板DNA 1ng~1ug上游引物（10 μM） 5 μl下游引物（10 μM） 5 μlddH2O Up to 50 ulPCR扩增循环参数 循环数温度时间1st Cycle90°C2min25-40 Cycles90°C15sTm15s72°C1kb/1minLast Cycle72°C5min | ||
| 2.以RNA为模板进行RT-PCR扩增反应体系配制3173 DNA Polymerase (5 U/μl) 1 μl5×Best PCR Buffer 25 μldNTP Mixture (10 mM each) 5 μl模板RNA 10ng~1ug上游引物（10 μM） 2 μl下游引物（10 μM） 2 μlddH2O Up to 50 ulPCR扩增循环参数 循环数温度时间1st Cycle60°C60min35 Cycles90°C15s57°C15s72°C1kb/1minLast Cycle72°C5min | ||
| 3.缺刻恒温PCR扩增3173 DNA Polymerase (5 U/μl) 1 μl10×3173 Isothermal Buffer 5 μldNTP Mixture (10 mM each) 5 μl模板DNA 10ng~1ug引物（500 μM） 5 μlddH2O Up to 50 μl55°C孵育2~8h。 |
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