| 供货周期： | 现货 |
| 品牌： | LMAI Bio |
| 规格： | 10T/50T |
| 货号： | LM2601 |
| CAS号： |
Gibson无缝连接试剂盒
| Gibson无缝连接试剂盒是一种混合酶系统，其可将任意方法线性化的载体和与其两端具有重叠区域的一个或多个PCR片段定向重组连接。该方法不依赖于T4 DNA连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，可在30分钟内实现PCR片段高效定向无缝克隆至载体的任意位置，从而获得完整的双链DNA分子。该试剂盒使用简单，只需加入合适比例的载体和PCR片段在50℃孵育15-30min即可完成片段的连接。 | ||||
优势 | ||||
| ||||
原理 | ||||
| ||||
 | ||||
组分 | ||||
| 组分名称10T50T2XGibson Assemble Mix50μl250μl | ||||
储存 | ||||
| -20℃可保存2年，-80℃可保存5年，避免反复冻融。 | ||||
检测效果和应用实例 | ||||
| 1. KpnI/HindIII酶切pCold-sumo-M vector获得线性化载体，插入与载体有25nt同源臂的引物扩增Gp32基因（966bp），然后应用2xGiboson Assembly Mix连接线性化载体和Gp32，50℃孵育15min，然后取5μl连接产物转化DH5a感受态细胞，涂板过夜后菌检。其中左图为长斑情况对比，A为对照（不加片段）B为实验组（Gp32片段），右图为挑取32个斑进行PCR扩增后电泳，其中阳性检出率为31/32(~97%)。2.PCR 扩增pCold-sumo-M vector获得线性化载体，插入与载体有15nt同源臂的引物扩增Bsu基因（1.4kb），然后应用2xGiboson Assembly Mix连接线性化载体和Bst，50℃孵育30min，然后取5μl连接产物转化DH5a感受态细胞，涂板过夜后菌检。其中左图为长斑情况对比，A为对照（不加片段）B为实验组（Bsu片段），右图为挑取40个斑进行PCR扩增后电泳，其中阳性检出率为40/40(~100)。3. KpnI/HindIII酶切pCold-sumo-M vector获得线性化载体，插入与载体有25nt同源臂的引物扩增Gp32基因（966bp），加入的载体与片段的摩尔比分别是1:1、1:2、1:3的长斑情况对比，其中1:3时长斑数量最多，三者菌检阳性率无显著差异。 | ||||
相关产品
关注
拨打电话
留言咨询
