背景
自2020版中国药典四部2341农药残留量测定法中新增第五法,药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法,木香药材由于富含挥发油成分较多,基质效应较为严重,药典规定的4种前处理方法都难以解决。
纳谱分析根据挥发油成分特点,调整亲水亲脂聚乙烯吡咯烷酮填料技术参数,特别推出SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱(200mg/6mL)产品。相比市面上常规HLB产品,HLB-A可以吸附更多挥发油类成分,并且在除色效果上也较好,从而降低了基质效应。
本次,我们来看看木香项目的前处理效果。
★
适用范围
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本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法方式二,适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。
★
实验步骤
★
一
对照品溶液的制备
1.1 混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1mL,置20mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;
1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。
1.3 空白基质溶液的制备
取空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份),置氮吹仪上,40°C 水浴浓缩至约0.6mL,分别加人混合对照品溶液l0μL、20μL、50μL、100μL、150μL、200μL,加乙腈稀释至lmL,涡旋混匀,即得。
二
供试品溶液的制备
2.1 提取
称取5g木香样品,加氯化钠1g,加入50mL乙腈,匀浆处理2分钟,离心后分取上清液,残渣再加50mL乙腈,匀浆处理1分钟,离心后,合并两次提取上清液,减压浓缩至3~5mL,加乙腈定容至10mL,摇匀,待净化。
三
净化
SPE柱:SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱(200mg/6mL)/ SelectCore HLB固相萃取柱(200mg/6mL)
净化:量取直接提取法制备的供试品溶液3mL,过SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱,收集全部净化液,混匀,即得;(同法用SelectCore HLB固相萃取柱进行平行试验)
GC/MS/MS测定:取过固相萃取柱后溶液1mL,加入0.3 mL内标溶液,混匀,过PTFE膜,上机分析。
LC/MS/MS测定:取过固相萃取柱后溶液1mL,加入0.3 mL水,混匀,过PTFE膜,上机分析。
四
高效液相色谱-串联质谱法
(岛津 LC-MS 8050)
色谱条件
色谱柱:ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm,2.6 μm)
流动相:
A:0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)
B:乙腈/0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L 甲酸铵)=95/5
梯度:
时间(min) | 流速 (mL/min) | 流动相A (%) | 流动相B (%) |
0 | 0.3 | 70 | 30 |
1 | 0.3 | 70 | 30 |
12 | 0.3 | 0 | 100 |
14 | 0.3 | 0 | 100 |
14.1 | 0.3 | 70 | 30 |
16 | 0.3 | 70 | 30 |
流速: 0.3 mL/min
柱温: 40 ℃
进样量: 1 µL
质谱条件
离子源: 电喷雾离子源(Electrospray ionization,ESI)正离子扫描
监测方式:多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)
离子源接口电压:4.5kV
雾化气:氮气3.0L/min
加热气:干燥空气10.0L/min
DL温度:250℃
加热模块温度:400℃
接口温度:300℃
干燥气:N2 10 L/min
图1:ChromCore C18-MS Pesticides 色谱柱30种农药标准品(以甲胺磷计0.025 μg/ml)的典型谱图
图2:木香空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB-A净化)
图3:木香空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB净化)
从以上木香基质加标LC/MS/MS图对比来看,HLB-A处理后的加标样品中部分农残成分的响应值更大,让分析检测结果更为准确。
五
气相色谱-串联质谱法
(岛津 GC-MS 8030)
色谱条件
色谱柱:DB-17MS,30m×0.25mm,0.25μm;
进样口温度:250℃;
升温程序:初始温度为60℃,保持1min;以10℃/min升温至160℃;再以2℃/min升温至230℃,最后以15℃/min升温至300℃,保持6min;
载气:高纯氦气(纯度>99.999%);
进样方式:不分流进样;
恒压模式:146kPa;
进样量:1μL。
质谱条件
电离方式:电子轰击电离源(EI);
电离能量:70Ev;
传输线温度:250℃;
离子源温度:250℃;
监测方式:多反应检测模式(MRM);
溶剂延迟:10.0min。
表1 木香中33种农药残留的的测定添加回收结果(%)
农残成分 | 回收率 | 农残成分 | 回收率 |
甲胺磷 | 87.9% | 甲磺隆 | 96.1% |
甲基对硫磷 | 75.1% | 氯磺隆 | 102.3% |
对硫磷 | 63.4% | 胺苯磺隆 | 95.5% |
久效磷 | 99.8% | 甲拌磷 | 101.1% |
磷胺 | 100.2% | 甲拌磷砜 | 95.8% |
α-六六六 | 92.4% | 甲拌磷亚砜 | 98.9% |
β-六六六 | 110.2% | 甲基异柳磷 | 88.2% |
γ-六六六 | 90.5% | 内吸磷-O | 94.3% |
δ-六六六 | 63.4% | 内吸磷-S | 89.4% |
2,4'-滴滴涕 | 64.1% | 克百威 | 96.8% |
4,4'-滴滴滴 | 69.8% | 3-羟基克百威 | 104.9% |
4,4'-滴滴涕 | 63.5% | 涕灭威 | 90.3% |
4,4'-滴滴伊 | 66.1% | 涕灭威砜 | 96.0% |
杀虫脒 | 84.7% | 涕灭威亚砜 | 104.0% |
除草醚 | 83.3% | 灭线磷 | 85.2% |
艾氏剂 | 80.5% | 氯唑磷 | 80.0% |
狄氏剂 | 76.7% | 水胺硫磷 | 70.5% |
苯线磷 | 79.8% | α-硫丹 | 94.5% |
苯线磷砜 | 89.2% | β-硫丹 | 76.2% |
苯线磷亚砜 | 90.8% | 硫丹硫酸酯 | 89.3% |
地虫硫磷 | 66.4% | 氟虫腈 | 97.9% |
硫线磷 | 76.4% | 氟虫腈砜 | 101.0% |
蝇毒磷 | 93.8% | 氟虫腈亚砜 | 103.2% |
治螟磷 | 81.5% | 氟甲腈 | 97.9% |
特丁硫磷 | 80.3% | o,p'-三氯杀螨醇 | 90.7% |
特丁硫磷砜 | 88.9% | p,p'-三氯杀螨醇 | 71.3% |
特丁硫磷亚砜 | 102.8% | 硫环磷 | 96.6% |
甲基硫环磷 | 98.7% |
注:磺隆类、三氯杀螨醇农残用3mL供试品溶液净化时,回收率偏低,可以另取5mL供试品溶液净化,回收率可以满足药典要求(回收率红色字体代表的是5mL样品过柱)。
六
处理后溶液的颜色比对
木香提取液过HLB-A柱
木香提取液过HLB柱
由上图可以看出,木香提取液经过SelectCore HLB-A中药农残专用柱净化后样品颜色澄清透明,而常规HLB柱净化后样品颜色较深。
七
木香过HLB与HLB-A SPE柱的
部分农残基质响应的区别
(左边为HLB,右边为HLB-A)
甲拌磷砜
特丁硫磷砜
地虫硫磷
八
实验讨论
木香主要含挥发油类、内酯类等成分,尤其是挥发油类成分,对于实验干扰较大。通过以上实验数据比对,可以看出,SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱,针对木香的挥发性成分去除效果良好,极大的消除了由于基质效应带来的检测灵敏度下降、峰形不佳等问题,尤其对有机磷类农残成份的检测准确性提升较明显,其指标均能满足药典要求。并且该方法操作方便,不需要固相萃取柱活化步骤,提取液直接过柱就可以测定。
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