菊花为菊科植物菊的干燥头状花序,药材按产地和加工方法不同,分为“亳菊”、“滁菊”、“贡菊”、“杭菊”、“怀菊”,含有挥发油类、色素类成分。近年来,菊花的主要问题体现在农药残留方面,33种农残合格率较低,正因如此,最近国抽2022年特意要求加强菊花农残的监管。
今天,我们来用QuEChERS法和固相萃取法分别来看菊花项目的前处理效果吧(以下实验样品为贡菊)。
适用范围
本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法2和QuEChERS法。
实验步骤
一
对照品溶液的制备
1.1 混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1mL,置20mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;
1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。
1.3 空白基质溶液的制备
取菊花空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份),置氮吹仪上,40°C 水浴浓缩至约0.6mL,分别加入混合对照品溶液10μL、20 μL、50 μL、100μL、150μL、200μL,加乙腈稀释至1mL,涡旋混匀,即得。
二
供试品溶液的制备
2.1 固相萃取法
2.1.1提取:
精密称取5g样品(3号筛),加氯化钠1g,加入50mL乙腈,匀浆处理2分钟,离心后分取上清液,残渣再加50mL乙腈,匀浆处理1分钟,离心后,合并两次提取上清液,减压浓缩至3~5mL,加乙腈定容至10mL,摇匀,待净化。
2.1.2净化:
GCMSMS样品:
SPE柱:SelectCore HLB-A中药农残专用柱200mg/6mL
净化:量取上述菊花提取液5mL(直接提取法),过SelectCore HLB-A中药农残专用柱,收集全部净化液,混匀,即得。
GC/MS/MS测定:精密量取过固相萃取柱后的溶液1mL,氮吹至0.4mL加入混合对照溶液,乙腈定容至1mL,再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22μm尼龙针式过滤器,上机分析。
LCMSMS样品:
SPE柱:SelectCore HLB固相萃取柱200mg/6mL
净化:量取上述菊花提取液3mL(直接提取法),过SelectCore HLB 固相萃取柱,收集全部净化液,混匀,即得。
LC/MS/MS测定:精密量取过固相萃取柱后溶液1mL氮吹至0.4mL加入混合对照品液,乙腈定容至1mL,再加入0.3mL水,混匀,过0.22μm尼龙针式过滤器,上机分析。
2.2 QuEChERS法
2.2.1提取:
取供试品粉末(过三号筛)1.5g,精密称定,置50mL聚苯乙烯具塞离心管中,加入1%冰醋酸溶液15mL,涡旋使药粉充分浸润,放置30分钟,精密加入乙腈15mL,涡旋使混匀,置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟,加入QS-002盐包,立即摇散,再置振荡器上剧烈振荡(500次/分)3分钟,于冰浴中冷却10分钟,离心(每分钟4000转)5分钟,待净化。
2.2.2净化:
Q法净化管:Q-15PCSG01 SelectCore QuEChERS净化管 15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90 mg GCB
净化:取上述提取液上清液9mL置Q-15PCSG01净化管中涡旋使充分混匀,置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟使净化完全,离心(每分钟4000转)5分钟,即得。
GC-MS/MS测定:精密吸取上清液5mL,置氮吹仪上于35°C 水浴浓缩至约0.4mL,加入混合对照品液再加乙腈稀释至1. 0L,涡旋混匀,再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22um滤头,上机分析。
LC-MS/MS测定:精密吸取上清液5mL,置氮吹仪上于35°C 水浴浓缩至约0.4mL,加入混合对照品液再加乙腈稀释至1. 0L,涡旋混匀,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22um滤头,上机分析。
三
气相色谱-串联质谱法
(岛津 GC-MS -TQ8040 NX)
色谱条件
色谱柱:SHIMADZU SH-Rxi-17Sil MS,30m×0.25mm, 0.25μm;
进样口温度:250℃;
升温程序:初始温度为60℃,保持1min;以10℃/min升温至160℃;再以2℃/min升温至230℃,最后以15℃/min升温至300℃,保持6min;
载气:高纯氦气(纯度>99.999%);
进样方式:不分流进样;
恒压模式:146kPa;
进样量:1μL。
质谱条件
电离方式:电子轰击电离源(EI);
电离能量:70Ev;
接口温度:250℃;
离子源温度:250℃;
监测方式:多反应检测模式(MRM);
溶剂延迟:10.0min。
GCMSMS监测目标物注意事项:
氟虫腈砜保留时间往后漂移1min左右(参考);
水胺硫磷参考LC-MS/MS结果。
四
高效液相色谱-串联质谱法
(岛津 LC-MS 8045)
色谱条件
色谱柱:ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm,2.6μm)
流动相:
A:0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)
B:乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)=95:5
梯度:
时间 (min) | 流速 (mL/min) | 流动相A (%) | 流动相B (%) |
0 | 0.3 | 70 | 30 |
1 | 0.3 | 70 | 30 |
12 | 0.3 | 0 | 100 |
14 | 0.3 | 0 | 100 |
14.1 | 0.3 | 70 | 30 |
16 | 0.3 | 70 | 30 |
流速: 0.3mL/min
柱温: 40℃
进样量: 2µL
质谱条件
离子源: 电喷雾离子源(Electrospray ionization,ESI)正离子扫描
监测方式:多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)
离子源接口电压:4.5kV
雾化气:氮气3.0L/min
加热气:干燥空气10.0L/min
DL温度:250℃
加热模块温度:400℃
接口温度:300℃
干燥气:N2 10L/min
LCMSMS监测目标物注意事项:
自动进样器温度设置不宜过低,否则可能出现沉淀,导致分析结果不准确,回收率低,且有堵塞进样针的风险,建议20℃以上为宜。
五
实验结果
QuEChERS法处理菊花基质LOQ浓度点加标谱图
(GC-MS/MS方法)
QuEChERS法处理菊花基质LOQ浓度点加标谱图
(LC-MS/MS方法)
六
添加回收率
表1(固相萃取法)
菊花中33种农药残留的测定添加回收结果(%)
表2(QuEChERS法)
菊花中33种农药残留的测定添加回收结果(%)
七
实验讨论
通过以上实验数据可以看出,固相萃取法使用SelectCore HLB-A 200mg/6mL固相萃取柱和SelectCore HLB 200mg/6mL固相萃取柱,QuEChERS法使用Q-15PCSG01 SelectCore QuEChERS净化管 15mL净化后的菊花样品回收率都比较良好,为菊花的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。
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