食品合成着色剂
别名:食品合成染料
食品合成着色剂被广泛应用于食品加工过程中。鉴于合成着色剂的不安全性,国家加强了对这类合成着色剂的监管,制订了食品合成着色剂的测定标准(GB5009.35-2016)。其中的前处理方法采用的是对于不含赤藓红的样品使用聚酰胺吸附法,含赤藓红的样品按照液-液分配法,但是该方法有一定的局限性,存在着操作繁琐,并且回收率数据不稳定,特别是针对复杂基质的着色剂测定,如话梅、肉制品等,数据波动较大。
最近更新的国标《食品中合成着色剂的测定GB 5009.35-2023》将食品中合成着色剂检测种类由7种增加至11种,并且检验方法也进行了调整,采用的是乙醇氨水提取,经聚合物基质的弱阴离子交换混合模式的固相萃取柱,可以针对合成着色剂中含有苯磺酸和苯甲酸结构的离子基团可以更好的结合,保证分析的重现性。纳谱分析依据新国标推出的SelectCore WAX固相萃取柱,采用单分散聚乙烯吡咯烷酮基质,活化淋洗洗脱步骤相比其它公司产品可以更快的处理,并且其除杂效果好,回收率高且稳定,适用于多个复杂基质样品的检测。
一、替代的标准
食品安全国家标准
GB 5009.35-2023代替GB 5009.35-2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》、GB 5009.141-2016《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》、GB/T 9695.6-2008《肉制品胭脂红着色剂测定》、GB/T 21916-2008《水果罐头中合成着色剂的测定高效液相色谱法》。
二、适用范围
食品中合成着色剂的测定
参照GB 5009.35-2023食品中合成着色剂的测定,本标准适用于饮料、配制酒、调制乳、调味糖浆、风味发酵乳等、冷冻饮品(风味冰、冰棍类)、加工水果、腌渍的蔬菜、糖果、酱及酱制品、香辛料、果冻、杂粮粉及其制品、面糊、淀粉及淀粉类制品、胶原蛋白肠衣、即食谷物、谷类和淀粉类甜品、糕点上彩装、蛋卷、焙烤食品馅料及表面用挂浆等、可可制品、巧克力和巧克力制品、调制乳粉、调制奶油粉、调制炼乳、膨化食品、加工坚果与籽类、熟制豆类、糕点、熟肉制品、复合调味料和冰淇淋、雪糕等中11种合成着色剂(柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、喹啉黄和赤藓红)的测定。
二、实验步骤
1、溶液配制
1.1 乙醇氨水溶液:量取无水乙醇700 mL,加入4 mL氨水,用水稀释并定容至1 L,混匀。
1.2 5%甲醇水溶液:移取甲醇5 mL,用水稀释并定容至100 mL,混匀。
1.3 2%氨水甲醇溶液:移取2 mL氨水,用甲醇稀释至100 mL。
1.4 乙酸铵溶液(20 mmol/L):称取1.54 g乙酸铵,加水溶解并稀释至1000 mL。
1.5 乙酸铵缓冲溶液,pH=9.0:乙酸铵溶液(20 mmol/L)加氨水调pH至9.0。
1.6 2%甲酸水溶液:移取甲酸2 mL,用水稀释至100 mL。
2、样品制备
提取
话梅蜜饯提取:准确称取试样2 g(精确至0.001 g),置于50 mL具塞离心管中,先加入适量水(2 mL~5 mL),50 ℃水浴加热混匀样品,加入25 mL乙醇氨水溶液,涡旋1 min,50 ℃超声或振摇(速率≥250 r/min)提取20 min,8000 r/min离心5 min,取上清液置于50 mL容量瓶中,每次加入约5 mL~10 mL乙醇氨水溶液重复提取操作至上清液无明显颜色,离心后合并上清液,用乙醇氨水溶液定容至50 mL,即得提取液。准确吸取提取液10 mL,50 ℃氮气浓缩至3 mL左右,分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解,作为待净化液。
酱鸭翅根提取:准确称取试样2 g(精确至0.001 g),置于50 mL具塞离心管中,加入20 mL石油醚,涡旋1 min,超声或振摇(速率≥250 r/min)提取10 min,8000 r/min离心5 min,弃去上清液,油脂含量较高的可重复提取一次,弃去上清液,加入25 mL乙醇氨水溶液,涡旋1 min,50 ℃超声或振摇(速率≥250 r/min)提取20 min,8000 r/min离心5 min(若离心后提取液仍然浑浊,可转入高速离心机专用管,15000 r/min离心5 min),取上清液置于50 mL容量瓶中,每次加入约5 mL~10 mL乙醇氨水溶液重复提取操作至上清液无明显颜色,离心后合并上清液,用乙醇氨水溶液定容至50 mL,即得提取液。准确吸取提取液10 mL,50 ℃氮气浓缩至3 mL左右,分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解,作为待净化液。
3、固相萃取方法
SelectCore WAX 150mg/6mL固相萃取柱:
3.1 活化:SelectCore WAX 150mg/6mL固相萃取柱,依次用6 mL甲醇和6 mL水活化固相萃取柱,保持柱体湿润;
3.2 上样:活化后立即将步骤2中的待净化液以2 s~3 s 1滴的流速加载到固相萃取柱上;
3.3 淋洗:依次用6 mL 2%甲酸水溶液和6 mL甲醇淋洗固相萃取柱,弃去淋洗液,真空抽2 min至柱体近干;
3.4 洗脱:用6 mL 2%氨水甲醇溶液洗脱,分两次加入,每次3 mL,流速低于2 s~3 s 1滴,收集洗脱液,于50 ℃氮气浓缩至近干,准确加入2 mL pH为9.0的乙酸铵缓冲溶液溶解,溶液用针筒过滤器,孔径0.45 μm的滤膜过滤,弃去2 滴~5 滴初滤液,取续滤液作为待测液。
4、高效液相色谱法测定
Column:ChromCore C18-AC,5μm,4.6×250mm
Mobile Phase:A) 乙酸铵溶液(20 mmol/L)
B) 甲醇
Gradient: t(min) A% B%
0.01 90 10
7.00 87 13
17.00 70 30
19.00 60 40
22.50 55 45
30.00 5 95
33.00 5 95
34.00 90 10
42.00 90 10
Flow rate: 1.0 mL/min
Temperature:30 °C
Injection: 10 μL
Detection: 415 nm(柠檬黄、喹啉黄)
520 nm(新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红和赤藓红)
610 nm(靛蓝、亮蓝)
实验谱图及加标回收率数据
实验谱图
Peaks:
1.柠檬黄
2.喹啉黄1
3.喹啉黄2
4.喹啉黄3
5.喹啉黄4
图1、415 nm波长下的合成着色剂标准品、酱鸭翅根样品、酱鸭翅根样品加标(20 mg/kg)对比图
Peaks:
1.苋菜红
2.新红
3.胭脂红
4.日落黄
5.诱惑红
6.酸性红
7.赤藓红
图2、520 nm波长下的合成着色剂标准品、酱鸭翅根样品、酱鸭翅根样品加标(20 mg/kg)对比图
Peaks:
1.靛蓝
2.亮蓝1
3.亮蓝2
图3、610 nm波长下的合成着色剂标准品、酱鸭翅根样品、酱鸭翅根样品加标(20 mg/kg)对比图
Peaks:
1.柠檬黄
2.喹啉黄1
3.喹啉黄2
4.喹啉黄3
5.喹啉黄4
图4、415 nm波长下的合成着色剂标准品、话梅蜜饯样品、话梅蜜饯样品加标(20 mg/kg)对比图
Peaks:
1.苋菜红
2.新红
3.胭脂红
4.日落黄
5.诱惑红
6.酸性红
7.赤藓红
图5、520 nm波长下的合成着色剂标准品、话梅蜜饯样品、话梅蜜饯样品加标(20mg/kg)对比图
Peaks:
1.靛蓝
2.亮蓝1
3.亮蓝2
图6、610 nm波长下的合成着色剂标准品、话梅蜜饯样品、话梅蜜饯样品加标(20mg/kg)对比图
加标回收率
★
因亮蓝通常呈现为两个峰,喹啉黄通常呈现为四个峰,所以根据标准溶液出峰情况,以各色谱峰总的峰面积之和计算回收率。
实验结论
由实验谱图和加标回收率结果可以看出,SelectCore WAX固相萃取柱可以有效去除食品中基质干扰,两种复杂基质中11种合成着色剂的回收率均在80%~110%之间,结果准确可靠;采用色素分析专用柱ChromCore C18-AC进行分离,色素峰形尖锐对称,分离度完全满足定性和定量要求。
SelectCore WAX固相萃取柱搭配ChromCore C18-AC色素分析专用柱,满足《食品中合成着色剂的测定GB 5009.35-2023》中11种合成着色剂的检测需求。
相关产品信息
常规规格货号 | |
产品描述 | 货号 |
SelectCore WAX固相萃取柱 150mg/6mL; 30/pkg | WAX060-060150-1 |
ChromCore C18-AC色素专用柱 5μm, 4.6×250mm | S009-050018-04625S |
亲水PTFE针式滤器 13mm×0.45μm; 100/pkg | F-1345PT |
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