低聚半乳糖 (GOS) 是一种具有天然属性的功能性低聚糖,其分子结构一般是在半乳糖或葡萄糖分子上连接1~7个半乳糖基,即Gal- (Gal) n-Glc/Gal (n为0-6) 。在自然界中,动物的乳汁中存在微量的GOS,而人母乳中含量较多,婴儿体内的双歧杆菌菌群的建立很大程度上依赖母乳中的GOS成分。因此,GOS是婴幼儿配方食品及乳品等中常用的添加剂之一。中华人民共和国卫生部2008年第20号公告批准低聚半乳糖为新资源食品,并规定了相应的使用标准。
2023年09月06日,GB 5009.289-2023《食品中低聚半乳糖的测定》正式发布,并于2024年03月06日实施。本文根据该国家标准中的检测方法,采用ChromCore HILIC-Amide色谱柱对食品中低聚半乳糖进行分析。
标准储备液 (10.00 mg/mL) :分别准确称取100 mg (精确至0.1 mg) 的乳糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准品,用水溶解并定容至10 mL,混匀。将各标准储备液转移至储液瓶中,于4 ℃保存,保存期1个月。
混合标准中间液 (1.000 mg/mL) :吸取各标准储备液 (10.00 mg/mL) 1.00 mL于10 mL 容量瓶中,加水定容至刻度,混匀。临用现配。
混合标准使用液 (10.0 μg/mL) :吸取混合标准中间液 (1.000 mg/mL) 0.1 mL于10 mL容量瓶中,加水定容至刻度,混匀。临用现配。
试样制备:取有代表性的样品至少200 g,液态样品摇匀;基质均匀的半固态和粉状样品混匀;其他样品需匀浆或粉碎均匀。如特殊需要,制备好的试样冷藏保存,备用。
试样处理:称取1.000 g试样于50 mL烧杯中,用水溶解,转移至50 mL容量瓶中,加水定容至刻度,混匀,作为试样液,待用。吸取20 μL试样液于2 mL具旋盖离心管中,加入200 μL 2-氨基苯甲酰胺衍生溶液,涡旋混合30 s,在60 ℃水浴中保温120 min,取出放至室温,加入1 mL乙酸铵溶液 (0.2 mol/L, pH 4.5±0.1) 涡旋混合30 s。再移取0.50 mL混合溶液于2 mL离心管中,加入200 μL,淀粉葡糖苷酶溶液 (约180 U/mL) ,在50 ℃水浴中保温30 min,取出放至室温,加入0.70 mL乙腈,混匀后6000 r/min离心5 min,上清液用0.22 μm有机微孔滤膜过滤后,供高效液相色谱测定。
混合标准使用液衍生:移取20 μL混合标准使用液于2 mL具旋盖离心管中,加入200 μL 2-氨基苯甲酰胺衍生溶液,涡旋混合30 s,在60 ℃水浴中保温120 min,取出放至室温,加入1 mL乙酸铵溶液 (0.2 mol/L, pH 4.5±0.1) 涡旋混合30 s。再移取0.50 mL混合溶液于2 mL离心管中,加入200 μL乙酸铵溶液 (0.2 mol/L, pH 4.5±0.1) ,在50 ℃水浴中保温30 min,取出放至室温,加入0.70 mL乙腈,混匀后6000 r/min离心5 min,上清液用0.22 μm有机微孔滤膜过滤后,供高效液相色谱测定。
色谱柱: ChromCore HILIC-Amide 3μm, 4.6×150mm
流动相A: 50 mM甲酸铵溶液, pH4.4±0.1
流动相B: 乙腈
梯度:
时间(min) | A% | B% |
0 | 2 | 98 |
7.5 | 2 | 98 |
8.0 | 16 | 84 |
16.0 | 16 | 84 |
45 | 39 | 61 |
45.1 | 2 | 98 |
50 | 2 | 98 |
流速: 1.0 mL/min;
荧光检测波长: Ex=355 nm; Em=430 nm;
柱温: 30 ℃;
进样量: 20 μL。
本文参考GB 5009.289-2023《食品中低聚半乳糖的测定》,使用纳谱分析的ChromCore HILIC-Amide色谱柱对食品中低聚半乳糖进行分析,混标中所有物质均能实现有效分离,样品中基质无干扰,满足标准检测要求。
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