方案摘要
方案下载应用领域 | 制药/生物制药 |
检测样本 | 治疗类生物药品 |
检测项目 | |
参考标准 | 无 |
疏水作用色谱(HIC)是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质等生物大分子的常用方法,也是测定ADC中DAR的重要手段。在HIC模式下,高盐浓度将待分离的样品吸附在固定相上,然后线性或阶段降低流动相中盐浓度有选择性地将样品洗脱。分离过程中,随着流动相中盐浓度的降低,疏水性弱的蛋白先被洗脱下来,而疏水性强的蛋白才随后被洗脱下来,BioCore HIC-Butyl对半胱氨酸偶联单抗药物中不同效价的分离具有很好的选择性。
Column: BioCore HIC-Butyl, 5 μm
Dimension: 4.6x100 mm
Mobile phase A: 2.0 M (NH4)2SO4 in 100 mM phosphate buffer, pH7.0
Mobile phase B: 100 mM phosphate buffer, pH7.0
Mobile phase C: Isopropanol
Gradient: t (min) %A %B %C
-10 75 25 0
0 75 25 0
1 75 25 0
15 0 75 25
20 0 75 25
Flow rate: 1.0 mL/min
Temperature: 30 ℃
Injection: 10 μL
Detection: UV 280 nm
Sample: Cysteine conjugated ADC (~1 mg/mL in mobile phase A)
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