供货周期: | 现货 |
品牌: | 钦诚生物 |
规格: | 50次 |
货号: | QC71206-50 |
CAS号: |
动物组织DNA提取试剂盒
英文名称:Column Animal DNAOUT
运输:常温
保存:常温
有效期:1年
货期:1-2天
其他:
产品介绍:
柱式法提取动物组织和培养细胞的DNA
产品及特点
本产品在动物 DNA提取基础上改良而得的柱式升级产
品,主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组 DNA。跟动物 DNA提取
相比,它具有下列特点:
1. DNA 更加纯净,大多数 DNA 样品的 OD260/280 值在 1.8-1.9 之间。
2. DNA 产率一般在 200ug/g 左右(跟组织种类密切相关)。
3. 可直接用于 PCR、酶切、杂交等后续反应。
4. 操作更加简单,离心吸附操作代替离心沉淀,整个过程室温操作约 10 分钟,
适合大规模样品处理。
5. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
6. 性价比高,质量和国外同类产品相当,但价格更便宜。
运输及保存 常温运输和保存、有效期一年。
自备试剂 氯仿(也可省略,但产量会降低)
使用方法 注意:溶液 A 容易产生沉淀,溶液 B 十分粘稠,用前均需要在 65℃水浴中加热使
沉淀溶解或粘稠度降低,用前充分摇匀。
1. 根据使用材料的不同进行下列操作:
a) 对贴壁细胞:吸尽培养液,在每 10 平方厘米细胞中加入 0.8 mL 预热的溶液
A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解,然后把裂解液转移到 1.5 mL 塑料离
心管中。
b) 对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每 1-5×106悬浮细胞中加入 0.8 mL
预热的溶液 A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到 1.5
mL 塑料离心管中。如果是 fibroblasts 或 carcinoma 细胞,0.8 mL 溶液 A
的细胞使用量不要超过 1×106 个细胞。
c) 对新鲜或冷冻的组织:先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入 10
mL 或 15 mL 塑料离心管中,每 50-100 mg 组织加 0.8 mL 预热的溶液 A,
用剪切式匀浆器匀浆 30 秒左右,然后把裂解液转移到 1.5 mL 塑料离心管中。
对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的 DNA),
建议组织的使用量不要超过 50 mg。
d) 对 DNALOCKER 保存组织:先用纸吸去 DNALOCKER 液体后再剪切成小块,其余
操作同新鲜或冷冻组织的处理。
2. 加入 0.4 mL 预热的溶液 B 到裂解液中。由于溶液 B 十分粘稠,可将 1mL 枪
头剪掉一截再用,也可以用称量方法加 0.4 g。加入溶液 B 后需要颠倒数次充
分混匀。
3. 65℃水浴 5-10 分钟。如果室温放置,DNA 产量将降低 10-20%。
4. 加入 0.2 mL 自备氯仿,振荡器上充分振荡混均 30 秒,此时溶液将呈乳白色。
一定要确保离心管底的液体被震荡起来。
5. 12000-15000 g 室温离心 2 分钟。上清透明,中间层为白膜(蛋白层)。
6. 小心将上清液平均转移到两个新的离心管中,避免触及中间的白膜。
7. 每个管中加入 1.5 倍体积的溶液 C,充分颠倒混匀。
8. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟,
12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心
吸附柱中,室温放置 2 分钟,12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液)。
9. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温离心半分钟,
弃穿透液。
10. 加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g 室温离心半分钟,
弃穿透液。
11. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液
会污染 DNA。
12. 室温放置半分钟使残留乙醇挥发。
13. 将离心吸附柱转移到一新的 1.5 mL 塑料离心管中,加入 50-100 uL DNA 洗
脱液 2.0,室温放置离心吸附柱 1-2 分钟。
14. 12000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 DNA 样品,可以立即
使用或存放于冰箱待用。
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