供货周期: | 现货 |
品牌: | 钦诚生物 |
规格: | 2UG |
货号: | QCP0908 |
CAS号: |
pBeloBAC11细菌人工染色体质粒(单拷贝)
基本信息
复制子: OriS
质粒大小: 7507bp
原核抗性: 氯霉素Chl
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
备注: 细菌人工染色体BAC质粒
质粒简介
随着基因组学时代的到来,克隆并利用生物的重要基因,研究这些基因的结构、功能和进化已成为遗传学领域的热点之一。生物体的许多重要性状都涉及到复杂的生理生化反应,受多基因或基因簇的控制,与成百上万碱基的DNA片段相关,此外,复杂基因组的物理作图和基因的图位克隆也涉及到大片段的研究,因此提高载体的容纳量一直是克隆载体的重要发展方向之一。
目前比较理想的细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)是指一种以F质粒(F-plasmid)为基础建构而成的细菌染色体克隆载体,命名为pBACs,其容量在50 - 300 kb之间,各种类型的pBACs在大肠杆菌都呈单拷贝。
BAC是以大肠杆菌致育因子(F因子)为基础的合成载体。F因子也称为F质粒,是一种“性质粒”,它可将宿主当然体基因转移到另一宿主细胞。F因子在大肠杆菌中的复制受到严格控制而保持低拷贝,一般为每个细胞1-2个拷贝,其parB基因能够排斥细胞中的外源性F质粒,限制了细胞内质粒分子间的重排,降低了重组BAC中外源DNA的重排水平和嵌合度。此外,F因子具有携带1M bp插入片段的潜能,这就使构具有大容量克隆能力的BAC载体成为可能。
BAC载体主要包括oriS,repE(控制F质粒复制)和parA、parB(控制拷贝数)等元件。以BAC为基础克隆的载体成嵌合体的频率较低,转化效率高,而且以环状结构存在于细菌体内,易于分离纯化,已被科学界广泛接受。目前主要用于大片段基因组文库的构建和大的基因簇(gene cluster)的相关研究,在各类生物基因组计划中发挥重要作用。
质粒图谱
pBeloBAC11细菌人工染色体质粒(单拷贝)使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pBeloBAC11细菌人工染色体质粒(单拷贝)注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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