供货周期: | 现货 |
品牌: | 钦诚生物 |
型号: | 2UG |
货号: | QCP0051 |
pRSFDuet-1大肠双表达质粒
基本信息
启动子: T7/Lac
复制子: RSF ori
终止子: T7 terminator
质粒分类: 大肠系列质粒;大肠其它质粒;大肠双框质粒
质粒大小: 3829bp
质粒标签: N-6×His,C-S
原核抗性: 卡那青霉素Kan(50μg/ml)
克隆菌株: DH5α等大肠杆菌
培养条件: 37℃,有氧,LB
表达宿主: BL21(DE3)等大肠杆菌
培养条件: 37℃,有氧,LB
诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物: ACYCDuetUP1-F(GGATCTCGACGCTCTCCCT) DuetUP2-F( TTGTACACGGCCGCATAATC)
3'测序引物: DuetDOWN1-R( GATTATGCGGCCGTGTACAA) T7-ter-R( TGCTAGTTATTGCTCAGCGG)
备注: 同时表达两个外源蛋白
质粒简介
pRSFDuet-1质粒是一种原核表达载体, N端含有一个6×His标签,C端含有一个S标签。该质粒含有多个常用的酶切位点,便于不同基因克隆。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导,目的基因被克隆到质粒载体上,受噬菌体强转录及翻译信号控制。
该质粒还携带有RSF复制因子、lacI基因和氯霉素抗性基因。可以使这个pETDuet-1载体在一个适当的宿主菌株的coexpression 4目标基因插入MCS1的基因可以使用ACYCDuetUP1引物和DuetDOWN1引物进行测序。插入MCS2的基因可以用DuetUP2引物和T7进行排序。
pRSFDuet-1 is designed for the coexpression of two target ORFs. The vector contains two multiple cloning sites (MCS), each of which is preceded by a T7lac promoter and ribosome binding site (rbs). The vector also carries the RSF1030-derived RSF replicon, lacI gene and kanamycin resistance gene (KnR). This vector can be used in combination with pACYCDuet™-1 , pCDFDuet™-1 , and pETDuet™-1 in an appropriate host strain for the coexpression of 4 to 8 target proteins. ORFs inserted into MCS1 can be sequenced using the ACYCDuetUP1 Primer and DuetDOWN1 Primer . ORFs inserted into MCS2 can be sequenced using the DuetUP2 Primer and T7 Terminator Primer . Unique sites are shown on the circle map.
质粒图谱
pRSFDuet-1大肠双表达质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pRSFDuet-1大肠双表达质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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