pSV2-DHFR小鼠基因哺乳细胞表达质粒

pSV2-DHFR小鼠基因哺乳细胞表达质粒

基本信息

启动子: SV40

终止子: SV40 poly(A) signal

质粒分类: 哺乳细胞载体;蛋白过表达质粒

质粒大小: 4976bp

原核抗性: 氨苄青霉素Amp

筛选标记: 甲氨蝶呤MTX

克隆菌株: 大肠杆菌DH5α

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 哺乳细胞

培养条件: 37℃，有氧，LB

5'测序引物: SV40pro-F: TATTTATGCAGAGGCCGAGG

3'测序引物: SV40pA-R: GAAATTTGTGATGCTATTGC

质粒简介

        pSV2-DHFR载体含有的是小鼠的DHFR基因，同时该载体是哺乳动物细胞和大肠杆菌穿梭质粒，在DHFR细胞系中，可以通过甲氨蝶呤对转染的细胞进行筛选。

质粒图谱

pSV2-DHFR小鼠基因哺乳细胞表达质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pSV2-DHFR小鼠基因哺乳细胞表达质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。