pBE2R枯草分泌质粒

参考价:¥980
供货周期: 现货
品牌: 钦诚生物
规格: 2UG
货号: QCP0331
CAS号:
上海钦诚生物科技有限公司
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产品详情

pBE2R枯草分泌质粒

 

基本信息

 

启动子: P43 promoter

复制子: ori

质粒分类: 枯草杆菌质粒;枯草游离质粒;枯草分泌质粒

质粒大小: 7014bp

原核抗性: 氨苄青霉素Amp

克隆菌株: 大肠杆菌Stbl3

培养条件: 37℃,有氧,LB

表达宿主: 枯草芽孢杆菌

5'测序引物: 根据序列设计引物

3'测序引物: 根据序列设计引物

 

质粒简介

        pBE2R穿梭表达载体是以pBE2为根本骨架,引入来自pWB980质粒的P43强启动子,并在其下流引入嗜碱芽孢杆菌碱性卵白酶信号肽和前肽构建而成。质粒拷贝数测定显示,pBE2R在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌每一个细胞中约含有1个拷贝。质粒稳固性试验显示:该质粒在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中各传30代而不产生丧失,可以在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中稳固存在。

 

质粒图谱pBE2R.png

 

 

pBE2R枯草分泌质粒使用说明:

    

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;

     4、42℃热激90s,再冰浴2min;

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;

     6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

     8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。

 

pBE2R枯草分泌质粒注意事项

 

      1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。

 


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