pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒

参考价:¥980
供货周期: 现货
品牌: 钦诚生物
规格: 2UG
货号: QCP0335
CAS号:
上海钦诚生物科技有限公司
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产品详情

pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒

 

基本信息

 

别名: pHH-43

复制子: colE1 ori

质粒分类: 大肠杆菌菌蜕制备质粒

原核抗性: 氯霉素Chloramphenicol

克隆菌株: 大肠杆菌DH5α

培养条件: 30℃,有氧,LB

 

质粒简介

         pHH43是构建有φX174噬菌体裂解蛋白的温控型表达质粒。该质粒可以转化入大肠杆菌DH5α中,诱导细菌裂解制备大肠杆菌DH5α菌蜕。在大肠杆菌杆菌上面打孔制造菌影,那段基因的酶切位点是kpn iEcoR V,由于含有E裂解基因,超过38度就可以引发,所以培养最好30度左右。

 

质粒图谱

pHH43.jpg

 

 

pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒使用说明:

    

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;

     4、42℃热激90s,再冰浴2min;

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;

     6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

     8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。

 

pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒注意事项

 

      1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。

 


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