OCLN试剂盒；人密封蛋白检测试剂盒（ELISA方法）

OCLN试剂盒；人密封蛋白检测试剂盒（ELISA方法）

• 产品名称：人密封蛋白(OCLN) ELISA 试剂盒

• 产品编号：ZY-OCLN-Hu

• 产品规格：96T/48T

• 实验方法：双抗夹心法

• 检测范围：0.156-10ng/mL

• 最低检测限：0.058ng/mL

• 保质期：12个月

ELISA实验样品制备指南：

在收集样品前需要建立完整的计划，必须清楚要检测的成分是否足够稳定。新鲜样品需尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时低温储存，如需周期性收集样品，需在造模取材后，将标本及时分装后-20℃或-80℃保存。因冰箱与室温存在较大温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以应避免反复冻融。

样品制备方法——液体样品：

液体类实验样品包含血清、血浆、尿液、胸腹水、细胞培养上清等。

细胞培养上清：将细胞培养基转移到离心管中，在4℃条件下以1500rpm离心10分钟。立即等分上清液并于-80℃下保存样品。尽可能减少样品冻融。

血清：室温血清自然凝固10-20分钟后，在4℃下以3000rpm离心10分钟。立即等分上清液并于-80℃下保存样品。保存过程中如产生沉淀，应再次离心。避免反复冻融样品。

血浆：收集全血于含抗凝血剂的管中，根据标本的要求选择EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，在4℃条件下以3000rpm离心10分钟。立即等分上清液（血浆）并于-80℃下保存样品。避免反复冻融样品。

尿液：用无菌管收集，并在4℃下以10000g离心2分钟。立即等分上清液并于-80℃保存样品。避免反复冻融样品。

唾液：用无菌管收集，并在4℃下以10000g离心2分钟。立即等分上清液并于-80℃保存样品。避免反复冻融样品。

样品制备方法——组织样品：

采集组织（冰上操作，并尽可能快速完成，以防止被蛋白酶降解）样品后，称组织净重，用液氮迅速冷冻保存备用。将样品保存在-80℃下以便后续使用或放置在冰上进行直接匀浆。加入一定量的组织提取缓冲液，用手工或匀浆器将样品充分匀浆。在4℃下以13000rpm离心20分钟。置于冰上，将上清液（可溶的蛋白质提取物）等分至新的冷却管中并在-80℃下保存样品。避免反复冻融样品。

酶标板整体背景高：

1）结合反应太强或时间过长：检查底物的稀释，使用建议的稀释度。当酶标板显色足够进行吸光度读取时立即用终止液终止反应。

2）底物溶液或终止液不是新配制：使用新配制的底物溶液。终止液应该是清亮的（如果它变黄，这是被污染的标志，需要重新配制）。

3）没有终止反应：如果底物反应没有被终止，颜色会继续变化。

酶标板在酶标仪读板前放置时间过长：颜色会继续变化（尽管加了终止液，依然会以很慢的速度变化)。

4）底物孵育过程没有避光：底物孵育应该在避光条件下进行。

5）抗体非特异性结合：确保进行了封闭并使用的是恰当的封闭液。我们建议使用5-10%的与二抗同种动物来源的血清或牛血清。确保板孔经过预处理以防止非特异结合。使用亲和力强、纯度高的抗体，最快经过了预吸收。

吸光度数值底：

使用的样品中没有显示出靶蛋白或者靶蛋白显示的水平低：检查靶蛋白表达系统，确保它在您的样品中被表达出来。如果靶蛋白的表达水平低，需要增加样品使用量，或者您可能需要选择一个更灵敏的测定方法。确保您使用的是没有超出测定方法检测范围的阳性对照。

抗体不足：确定使用的是建议的抗体量，为了使结果更好可能需要增加抗体的浓度。

底物溶液不是新鲜配制：使用前新鲜配制底物溶液。

孵育时间不够长：如果建议了孵育时间，确保按推荐的时间长度孵育抗体。为了使结果更理想，孵育时间可能需要增加。

吸光度数值高：

样品和/或阳性对照吸光度数值高。吸光度没有按样品在板子上的稀释度递减：样品或阳性对照的浓度过高，超出了试验方法检测的范围。重新设置试验方法或者在加样前通过稀释降低样品和对照的浓度，在处理结果计算浓度时考虑到所作的稀释。

酶标板上吸光度不规律：

吸液不一致：确保移液器使用正确并经过校准、确保枪头插得足够紧密。板子稀释时要特别仔细，注意确保每个枪头都吸上和排出正确量的液体，这对平行样品结果的一致性有很大影响。

抗体稀释液/试剂未混匀：为保证板子所有孔的浓度一致，确保所有的试剂和样品在加到板子上以前都被混合均匀。

板孔变干涸：确保所有孵育期间酶标板始终被盖好。放置一个潮湿的水盘(保持清洁，无菌水)在孵育箱的底部。

洗板不充分：这将导致一些孔没有其他孔清洗的好，残留不同量的未结合的抗体，使后面的结果产生不一致。

酶标板底部不净影响吸光度读取：读板前小心清洁酶标板底部。

阴性对照出现阳性结果：

夹心ELISA - 检测抗体与包被抗体反应：确定使用的是正确的包被抗体和检测抗体,他们之间不会互相反应。

酶标板洗板不彻底：用洗液充满板孔确保每孔被充分洗涤，洗板前确保所有的剩余抗体溶液被倒净。

抗体量过多导致非特异结合：根据推荐的用量使用合适浓度的抗体。

试剂/样品污染：试剂和样品可能被污染，或者由于孔之间的溅洒交叉污染。使用新鲜试剂，小心操作移液器。

需自备的设备及试剂

450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
单道或多道微量加液器及吸头
稀释样品的EP管
蒸馏水或去离子水
吸水纸
盛放洗液的容器

试剂盒的储存及有效期

未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。
使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。

稳定性
经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

注意：
试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后 1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！