供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 100μl/支 |
货号: | ZY1004 |
CAS号: |
BL21(AI)感受态细胞
BL21(AI) Chemically Competent Cell
BL21(AI)感受态细胞产品规格(CAT#:ZY1004)
BL21(AI): 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
基因型
F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA
BL21(AI)感受态细胞产品说明
BL21(AI)是大肠杆菌B/r型菌株(E.coli B/r)。BL21(AI) 来源于BL21菌株,为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株,这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。在培养基中添加L-阿拉伯糖可诱导araBAD启动子下游T7RNA聚合酶的表达进而促进目的蛋白的表达。在培养基中添加葡萄糖可抑制araBAD启动子下游T7RNA聚合酶的表达进而抑制目的蛋白的表达。BL21(AI) 感受态细胞适用于任何以T7启动子为基础的表达载体,能够进行高水平的重组蛋白表达。因为菌株能够对体内的T7 RNA聚合酶水平进行高效调节,BL21(AI) 感受态细胞能够表达对其他BL21细胞有毒性或抑制生长的蛋白。普通重组蛋白在BL21(AI) 菌株中获得产量和其他BL21菌株产量相当;对大部分毒性蛋白,在BL21(AI) 菌株中获得的产量高于BL21(DE3)pLysS菌株或BL21(DE3)菌株。BL21(AI) 感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg DNA。
BL21(AI)感受态细胞操作方法
1. BL21(AI)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含抗生素的2YT 或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
BL21(AI)感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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