供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 100μl/支 |
货号: | ZY1010 |
CAS号: |
Rosetta(DE3)感受态细胞
Rosetta(DE3) Chemically Competent Cell
Rosetta(DE3)感受态细胞产品规格(CAT#:ZY1010)
Rosetta(DE3): 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
基因型
F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm(DE3) pRARE(argU, argW, ilex, glyT, leuW, proL) (CamR)
Rosetta(DE3)感受态细胞产品说明
Rosetta(DE3)菌株具有氯霉素抗性,补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平,该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。Rosetta(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/μg DNA。
Rosetta(DE3)感受态细胞操作方法
1. Rosetta(DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT 或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
Rosetta(DE3)感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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