供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 100μl/支 |
货号: | ZY1006 |
CAS号: |
BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞
BL21 Star(DE3)pLysS Chemically Competent Cell
BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞产品规格(CAT#:ZY1006)
BL21 Star(DE3)pLysS: 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
基因型
F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (CamR)
BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞产品说明
BL21 Star(DE3)pLysS菌株来源于BL21(DE3),含有rne131突变(RNaseE基因),RNaseE基因的突变降低了內源RNase的积累,增强菌株细胞内mRNA的稳定性,从而提高异源蛋白的表达水平。主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达,同时含有大肠杆菌RNA聚合酶,也可用于非T7启动子表达载体(pGEX,pMAL等)的蛋白表达。由于BL21 Star(DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高,所以不适合毒性蛋白的表达。BL21 Star(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。pLysS质粒含有p15A复制起始子,可以和含有 pUC或pBR322等复制起始子的质粒兼容。BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。
BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞操作方法
1. BL21 Star(DE3)pLysS 感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
6. BL21 Star(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 μg/ml氯霉素,以防质粒丢失。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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