供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 100μl/支 |
货号: | ZY1021 |
CAS号: |
OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞
OrigamiB(DE3)pLysS Chemically Competent Cell
OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞产品规格(CAT#:ZY1021)
OrigamiB(DE3)pLysS: 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
基因型
F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR) pLysS CamR
OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞产品说明
Origami B (DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性。pLysS可表达T7溶菌酶(T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达),适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Origami B (DE3) pLysS菌株表达突变的硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶 (glutathione reductase) (gor),这两个酶是还原途径的关键酶,突变后有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。 此外,该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达,具有氯霉素、卡那霉素和四环素抗性,不能用于具有氯霉素,卡那霉素抗性质粒的表达。Origami B (DE3) pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。
OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞操作方法
1. Origami B (DE3) pLysS感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒,并用手拨打EP 管底混匀,冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作,转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。
4. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
5. 具有氯霉素,卡那霉素和四环素抗性,不能用于具有氯霉素,卡那霉素和四环素抗性质粒的表达。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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