供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 100μl/支 |
货号: | ZY1080 |
CAS号: |
R5421感受态细胞
R5421 Chemically Competent Cell
R5421感受态细胞产品规格(CAT#:ZY1080)
R5421 Competent Cell: 100μl/支 保存: -80℃(3个月)
pGADT7 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存:-80℃(12个月)
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存:-20℃(12个月)
PEG/LiAC: 5ml 保存: 4℃(12个月)
基因型
MATα ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1::pCK64
R5421感受态细胞产品说明
R5421酿酒酵母菌株为K+/钾离子缺陷型菌株,在文献中也称为CY162,MATα型,多用于K+/钾离子转运蛋白的鉴定试验中,也可用于K+/钾离子通道或钠钾离子泵的鉴定试验。Transformation marker为:ura3,leu2,该菌株可以在含有100mM KCl的培养基中国正常生长,在含有5-10mM KCl的培养基中生长缓慢,当培养基中KCl浓度低于0.5mM,R5421(CY162)细胞停止生长。R5421感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pGADT7质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
R5421感受态细胞操作方法
1. Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态,步骤如下:Carrier DNA 放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min,再次放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min以上。
2. 取100 μl冰上融化的R5421感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒0.5-3 μg,Carrier DNA10 μl,PEG/LiAc 500 μl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 μl 重悬,离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 μl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。
R5421感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4. R5421酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1 mm克隆。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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