供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 100μl/支 |
货号: | ZY1040 |
CAS号: |
EHA101化转感受态细胞
EHA101 Chemically Competent Cell
EHA101化转感受态细胞产品规格(CAT#:ZY1040)
EHA101: 100μl/支
pK7WGF2(control vector,10ng/μl ) 10μl
保存条件(保质期): -80℃(12个月)
基因型
C58 (rifR) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kanR) Nopaline
EHA101化转感受态细胞产品说明
EHA101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101 (pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pEHA
EHA101化转感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA,用手拨打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基,于28℃,200 rpm振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
(当平板只含有转化所用双元载体抗生素时,28℃培养48小时即可;平板中同时加入双元载体抗生素,20 μg/ml rif 时,需28℃培养60小时;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90小时)。
EHA101化转感受态细胞注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作,转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。
4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml 壮观霉素,若所用平板同时含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素,Ti质粒丢失的概率极低 (可以忽略)。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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