供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 5 ml |
货号: | ZY5001 |
CAS号: |
PEG/LiAc感受态细胞
K
PEG/LiAc感受态细胞产品规格(CAT#:ZY5001)
PEG/LiAC | ZY5001S | 5 ml | 4℃, 12个月 |
PEG/LiAC | ZY5001M | 50 ml | 4℃, 12个月 |
PEG/LiAc感受态细胞产品说明
PEG是一种高分子聚合物,只有分子量达到3000左右的PEG才会发挥最大的转化促进作用。酵母感受态细胞转化所需PEG分子量为4000,可促进酵母转化效率达到103-105 cfu/μg DNA。PEG在酵母转化中起到在高浓度LiAc环境中保护细胞膜,减少LiAc对细胞膜结构损伤的作用;同时PEG可促使质粒更紧密贴附酵母细胞壁。LiAc可使酵母细胞产生一种短暂的感受性状态,此时酵母能够摄取外源性DNA。PEG/LiAc是泽叶生物生产的酵母感受态细胞转化所必需的配套试剂,每个转化反应需要500 μl PEG/LiAc。
PEG/LiAc感受态细胞操作方法
1. Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态,步骤如下:Carrier DNA 放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min,再次放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min以上。
2. 取100 μl冰上融化的酵母感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 μg,Carrier DNA 10 μl,PEG/LiAc 500 μl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 μl 重悬,离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 μl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。
PEG/LiAc感受态细胞注意事项
1. PEG长时间静置易沉淀,在每次使用前务必摇晃,使试剂中各组分分布均匀。
2. PEG/LiAC 可在4℃长时间保存。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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