供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 50次 |
货号: | ZY61202-50 |
CAS号: |
柱式血液RNA提取试剂盒(柱式血液RNAout)
Column Blood RNAout
产品及特点 本产品经过基因精心优化而得,多项指标超过国内外同类产品。本产 品是基因在血液 RNAOUT(CAT#:3071)基础上开发的柱式升级产品, 专门从动物全血样品中快速提取总 RNA。跟血液 RNAOUT 相比,本产品具有 下列特点:
1. 比血液 RNAout 更加简单快捷,直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品,
不需裂解红细胞等任何预处理步骤,整个提取过程只需要十分钟左右,可以全在室温下进行。
2. 产量和纯度更高,OD260/280 均在 2.0 左右,产率一般为 2-5 ug/mL人血。
3. 每次微量提取的最大样品处理量可以达到 1.5 mL,高于进口的同类产品。
4. 与常用的抗凝剂(包括肝素,EDTA,柠檬酸钠,草酸钠)兼容,得到的RNA 可以直接用于 RT-PCR 和 Northern 杂交等研究。
运输及保存 常温运输及保存,有效期一年。
自备试剂 氯仿。
1. 将 0.2-1.5 mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到 1.5 mL 塑料离心管中。
2. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟,弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于 0.2 mL, 则需要减少血液的使用量,具体减少量需根据具体情况决定,因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。
3. 将 1 mL 溶液 A 加入到血液细胞沉淀中,用移液枪充分吹打沉淀使细胞裂解。
4. 将 0.3 mL 的溶液 B 加入到离心管中,剧烈震荡 30 秒。
5. 和 0.2 mL 氯仿加入到离心管中,剧烈震荡 30 秒。
6. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟,将上清液(为无色或浅红色,约0.5-0.9 mL)转移到另一干净离心管中。注意:转移的液体不要超过 0.7mL,否则下一步不能加入等体积的溶液 C。为防止污染,最好留 100 uL左右的上清液。下层有机相一般呈深红色,中间层为白色,含有 DNA,
蛋白质和其他细胞破碎物,避免触及或吸取。
7. 加入等体积的溶液 C,充分颠倒混匀。
8. 分两次将溶液转移到离心吸附柱中,每次转移后 12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。
9. 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。
10. 如果有必要,可以再加 0.3 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。注意:增加此步可以进一步提高 RNA 的纯度。
11. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的后续反应。
12. 将离心吸附柱转移到一个自备的 RNase-free 的收集管中,加入 50-100uL RNA 洗脱液,室温放置 1-2 分钟。
13. 12000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子(BioTechniques,28:414,2000)。
15. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度(1OD260 的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。人血 RNA 产率一般为 2-5 ug/mL。
16. RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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