供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 25次 |
货号: | ZY60817-25 |
CAS号: |
mRNA 纯化试剂盒
mRNA Isolation Kit
本产品就是基于此原理开发的、专门用于从总RNA中提取mRNA的试剂盒。
开发背景:
构建cDNA文库、、蛋白质体外翻译和RT-PCR检测稀有的mRNA等研究常常需要从总RNA中分离mRNA。mRNA只占总RNA的1%左右,但由于带poly(A)尾巴,所以可以通过与Oligo(dT)纤维素的亲和结合而与其他RNA(如rRNA、tRNA等)分离开。
试剂盒特点:
一站式,,即开即用,非常方便。
一次可以处理约10-15μg总RNA,从中可得0.1-0.5μg左右的mRNA。
Oligo(dT)纤维素吸附能力强,每克可以吸附50-80 OD的mRNA,相当于2000-3000μg mRNA。
离心法、只需要离心就可以完成,免去了常规的灌柱、洗柱等繁琐操作。
得到的mRNA可以直接用于构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR。
本试剂盒足够25次微量mRNA提取实验。
试剂盒组成:
运输及保存:
常温运输,收到货后Oligo(dT)纤维素最好放-20℃长期保存,有效期一年。
使用方法:
本产品提供25mg Oligo(dT)纤维素,每克Oligo(dT)纤维素能够结合50-80OD的mRNA。
将250μL结合液加入到装有25mg Oligo(dT)纤维素的离心管中。
洗涤纤维素:取10μL(相当于1mg Oligo (dT)纤维素)与0.5mL结合液混匀,室温放置5分钟。10μL相当于1mg Oligo (dT)纤维素。剩余部分放-80℃保存。1000g离心30秒,小心吸弃结合液后留Oligo (dT)纤维素沉淀待用。
将自备的总RNA 100μL(如果体积不足100μL,用RNase-free水补足),65℃加热5分钟。
加入等体积(100μL)的结合液,混匀后冷却到室温。
全部转移到装有Oligo(dT)纤维素的离心管中,混匀后室温放置5分钟,期间颠倒混匀数次。
4℃ 1000g离心5分钟,小心将上清转移到一个离心管中。此上清液是去除了mRNA的总RNA。可以-80℃保存作为阴性对照。如果mRNA回收失败也可以再次用于纯化。
洗涤一次:加入0.5mL结合液,混匀后4℃ 1000g离心5分钟,小心弃上清。
重复上步的洗涤步骤2-4次。
在加入50μL RNase-free水,混匀后4℃ 1000g离心5分钟,小心收集上清(mRNA)。
重复上步1次。
将各次收集的mRNA混合,即为mRNA溶液。
按微量核酸沉淀剂的方法沉淀mRNA,具体操作如下:
按2:1的比例将微量核酸沉淀剂与mRNA溶液混合。
注意:微量核酸沉淀剂取用前需要摇匀。
室温15000g离心10分钟。
弃上清后加自备的75%乙醇1mL,振荡混匀。
15000g离心5分钟,弃上清。
再短暂离心后小心吸弃上清,沉淀即为回收的mRNA沉淀,可溶于RNase-free水中直接使用或放-80℃保存。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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