供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 100次 |
货号: | ZY60903-100 |
CAS号: |
一步法质粒DNA提取试剂盒(一步法质粒DNAout)
One-step plasmid DNA extraction kit
基于碱变性原理的质粒小量制备(Miniprep)是分子克隆研究中最常用的方法之一,其操作包括三种溶液处理,一般需要30分钟左右的时间才能得到可以上柱的质粒DNA初提液。本产品采用自主开发的一步式细菌裂解技术,只需要一种溶液处理即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。
试剂盒特点:
1.一步式裂解细菌,比传统的碱变性方法更快捷。
2.产量跟经典碱变性法相当或更高,产率一般为3-5μg质粒DNA/mL 饱和菌液(对高拷贝质粒而言)。
3. DNA 纯度高,OD260/280一般在1.8左右,基因组DNA和RNA污染少。
4.可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆、测序等实验。
5. 重复性和稳定性好。
试剂盒组成:
储存条件:常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。
使用方法:
1. 用塑料离心管收集不超过3mL 过夜培养饱和菌液,室温12000~15000g离心半分钟,弃上清。注意:不能超过3mL菌液,否则质粒回收率将急剧降低。
2. 加入0.6-1mL溶液A(用前需摇匀),充分吹打或振荡裂解细菌直到裂解变澄清,一般需要半分钟左右。注:此方法不同于碱裂解法,故可以充分吹打。
3. 将裂解液全部转移到离心吸附柱中,室温静置2分钟使质粒DNA与膜结合。室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。如果一次不能将上清全部转移到离心吸附柱中,可以分两次进行。
4.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用预洗液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。注意: 如果通用预洗液放置在低温产生了沉淀,用前需要加热到60℃左右使之融化,混匀后再用。
5. 再在离心吸附柱中加入0.3mL的通用预洗液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。此步预洗最好别省略,否则DNA 纯度不高。
6.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。
7. 再在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。此为第二次洗涤。
8. 再在离心吸附柱中加入0.4mL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。此为第三次洗涤,如果不洗涤三次,最后得到的质粒DNA的OD260和280的比值达不到1.8。
9.室温 12000~15000g离心半分钟,甩干残留液体。注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响后续的电泳上样(DNA 沉不到加样孔里去)和酶反应。
10. 将离心柱置于一个新的1.5mL自备塑料离心管中,加入30-100μl DNA 洗脱液2.0,室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.0预热到65-80℃,则效果更好。
11.室温 12000~15000g离心半分钟,离心管底溶液即质粒DNA,可以直接用于后续实验或放冰箱长期保存。?
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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