供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 50次 |
货号: | ZY61206-50 |
CAS号: |
柱式动物DNA提取试剂盒(柱式动物DNAout)
Animal DNA column extraction kit
本试剂盒是在我司动物DNA提取试剂盒的基础上改良而得的柱式升级产品,主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组DNA。
产品特点:
1. DNA更加纯净,大多数DNA样品的OD260/280值在1.8-1.9之间。
2. DNA产率一般在200μg/g左右(跟组织种类密切相关)。
3.可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应。
4. 操作更加简单,离心吸附操作代替离心沉淀,整个过程室温操作约10分钟,适合大规模样品处理。
5. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
6. 性价比高,质量和国外同类产品相当,但价格更便宜。
试剂盒组成:
储存条件:常温运输和保存、有效期一年。
使用方法:
注意:溶液A容易产生沉淀,溶液B十分粘稠,用前均需要在65℃水浴中加热使沉淀溶解或粘稠度降低,用前充分摇匀。
1. 根据使用材料的不同进行下列操作:
a)对贴壁细胞:吸尽培养液,在每10平方厘米细胞中加入0.8mL预热的溶液A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解,然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。
b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5×106悬浮细胞中加入0.8mL预热的溶液A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。如果是fibroblasts或carcinoma细胞,0.8mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜或冷冻的组织:先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中,每50-100mg组织加0.8mL预热的溶液A,用剪切式匀浆器匀浆30秒左右,然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),建议组织的使用量不要超过50mg。
d)对DNAhold保存组织:先用纸吸去DNAhold液体后再剪切成小块,其余操作同新鲜或冷冻组织的处理。
2. 加入0.4mL预热的溶液B到裂解液中。由于溶液B十分粘稠,可将1mL枪头剪掉一截再用,也可以用称量方法加0.4 g。加入溶液B后需要颠倒数次充分混匀。
3. 65℃水浴5-10分钟。如果室温放置,DNA产量将降低10-20%。
4. 加入0.2mL自备氯仿,振荡器上充分振荡混均30秒,此时溶液将呈乳白色。一定要确保离心管底的液体被震荡起来。
5. 12000~15000g室温离心2分钟。上清透明,中间层为白膜(蛋白层)。
6.小心将上清液平均转移到两个新的离心管中,避免触及中间的白膜。
7. 每个管中加入1.5倍体积的溶液C,充分颠倒混匀。
8. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液)。
9. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
11. 12000~15000g室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
12.室温放置半分钟使残留乙醇挥发。
13. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中,加入50-100μL DNA洗脱液2.0,室温放置离心吸附柱1-2分钟。
14. 12000~15000g室温离心半分钟,离心管中溶液即为DNA样品,可以立即使用或存放于冰箱待用。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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