供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 50次 |
货号: | ZY620720-50 |
CAS号: |
柱式冻存血液DNA提取试剂盒(柱式冻存血液DNAout)
Frozen blood DNA column extraction kit
血液DNA是重要的研究材料,但是血液DNA在常温下存放的时间很短,因此很多血液样品都是冻凝存放。由于冻存过程中形成的冰晶会刺破细胞膜,释放出DNA,因此从冻存血液中高效提取DNA一直是个棘手的问题。本产品就是北京我公司开发的专门用于从冻存血液中提取DNA的试剂盒。
产品特点:
1.适用于各种动物血液,包括禽类和昆虫。
2. 微量提取,每次可处理400μL 血液。
3. DNA 完整性好,纯化后长度在20-50 Kb 之间。
4. DNA 纯净,OD260/OD280在1.8-2.0 之间,可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。DNA产量一般在10μg/mL 血液。
5. 操作简单,整个过程约20分钟,室温操作,适合大规模样品处理。
试剂盒组成:
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
1.从-20℃或更低的冰箱中取出血液样品,室温下静置融化。
2. 将400μL 解冻的血液转移到一个1.5mL的塑料离心管中,加入400μL溶液A,充分震荡混匀。如果是禽类血液,则少加10倍,只加40μL。
3.在混合液中加入400μL溶液B和200μL 氯仿(自备),振荡1分钟。由于离心管比较满,所以需要确保管底溶液转动起来,否则只是液面振动而已。
4. 4℃12000 g离心10分钟,小心将上清转移至一新的1.5mL塑料离心管
中。注意:最好不要室温离心,如果室温离心,则离心后部分样品的中间白色层可能会很厚,只能得到很少的上清。
5. 将约0.7-0.8mL上清转移到10-15mL塑料离心管中(不要使用玻璃离心管,否则DNA 会吸附到管壁上。常用的培养提质粒用的细菌的培养管即可)。
6. 加入2.5倍上清体积的溶液C(2mL),立即摇晃混匀。
7. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中,每次0.7mL左右,转移后静置2-5分钟,以使DNA与膜充分结合,然后室温12000 g离心30秒,弃收集管中的废液,然后再加入0.7mL,重复上述操作,直到全部混合液挂柱。
8.在离心吸附柱中加入0.7mL 通用洗柱液,室温12000 g离心30秒,弃收集管中的废液。
9.在离心吸附柱中再加入0.3mL 通用洗柱液,室温12000 g离心30秒,弃收集管中的废液。
10.室温12000 g离心30秒,去尽残留液体(此步骤十分重要,不要省略,否则残留的含乙醇的通用洗柱液将抑制后续的酶反应)。
11. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管中,加入50μL DNA 洗脱液2.0,室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.0在65℃预热后再使用,洗脱DNA的效果更佳。
12.室温12000 g离心30秒,离心管底部溶液即DNA溶液,可立即使用或-20℃长期保存。
13. 本产品所用离心吸附柱吸附能力比较强,如果再次用DNA 洗脱液2.0洗脱,还能洗脱下一些血液DNA。
疑难解答:
Q:保存血液样品时温度越低越好吗?
A:不是。Tegelstrom 曾经比较了分别在-70℃,-20℃,4℃保存了6个月的蛙血,发现保存温度越低,血液DNA的断裂越严重。
Q:本产品是否可以用于放量操作?
A:可以在大的离心管中进行放量操作,如每次处理5-100mL 血液,只是客户需要单独购买红细胞裂解液,并按比例增加溶液A和溶液B的用量。
Q:冷冻血液为何DNA产量很低?
A:冷冻过程中形成的冰晶刺破了细胞膜和细胞核膜,红细胞裂解液处理时释放的DNA将进入上清并丢失,所以最后得到的DNA是没有被冰晶刺破的细胞的DNA。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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