供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 4次 |
货号: | ZY60926-4 |
CAS号: |
玻璃珠法大提柱式真菌DNA提取试剂盒(玻璃珠法大提柱式真菌DNAout)
Glassbeads Large-Scale Column Fungal DNAout
产品及特点 本产品在柱式真菌 DNAout(CAT#:70901)基础上改良而的的大提升级产品,主要用于大量快速从各种真菌材料中提取基因组 DNA。跟柱式真菌 DNAout 相比,它具有下列特点:
1. 处理量大,一次可以处理 1-3g 各种真菌组织。
2. 纯度高,OD260/280 一般在 1.8 以上。不含污染和抑制剂,得到的 DNA 可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplex PCR、RAPD、RELP、AFLP、Southern Blotting,microsatellite analysis 等各种后续分子生物学实验。
3. 采用玻璃珠法破碎细胞,属于物理方法,远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好,也不容易带入外援真菌 DNA(注:文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源真菌 DNA 污染,用于提取真菌 DNA 往往会造成污染。这些文献可从本公司本产品介绍网页下方下载)。
4. 产率一般在 10-100ug/g 真菌样品。离心吸附柱最大吸附量为 800ug。
5. DNA 片段长度一般在 20-40kb 左右。
6. 适用范围广,适用于度大多数真菌材料,包括酵母(S.cerevisiae、S.pomb、Pichiapastoris)等。
运输及保存 常温运输,4℃保存,有效期一年。
自备试剂 无。
使用方法 1. 对菌液:取 60-100 mL 过夜培养的真菌菌液 (OD600一般在 1 以上)到干净的塑料
离心管中,12000 rpm 离心 2 分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落:用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约 1 g),转移到装有20 mL 无菌水的干净的塑料离心管中,洗涤下接种环上的菌体。12000 rpm 离心2 分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料,一般取 1-3 g 左右,直接加入到离心管中,在材料中加入无菌水 20mL,振荡半分钟后 12000rpm 离心 2 分钟弃上清留沉淀。
4. 沉淀中加入 10 mL 溶液 A 和 10 克的玻璃珠,涡旋震荡 10 分钟,可以延长震荡时间。
5. 加入 10 mL 的溶液 B,涡旋震荡 5 分钟,12000rpm 离心 2 分钟,将上清液全部转移到一个 50 mL 的干净的塑料离心管中。
6. 在上清中加入 3 倍体积的溶液 C,颠倒数次混匀后,分三次上离心吸附柱,每次上柱后均先室温放置 2 分钟,然后 12000rpm 离心 1 分钟,倒掉穿透液,再第二次上柱,重复上面的操作,直到挂柱步骤完成。
7. 将 20 mL 通用洗柱液加入离心柱,12000rpm 离心 1 分钟,弃穿透液。
8. 重复上步操作一次。
9. 12000rpm 空甩 1 分钟去除残留液体。
10.将离心柱放置在一新的 50 mL 塑料离心管中,加入 500uL DNA 洗脱液 2.0。
11.室温放置 5 分钟后 12000rpm 离心 1 分钟,管底即为真菌 DNA 样品,吸取离心管中的 DNA 溶液重新滴加在吸附柱上,离心洗脱以收集更多的 DNA。
12.所得 DNA 可立即使用,也可长期保存在-20℃。
13.注:如离心机转速不能达到 12000rpm,可以用最大转速离心 10-15min 代替12000rpm 离心 1-2min。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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