供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 20次 |
货号: | ZY631084-20 |
CAS号: |
Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒
Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
血液样品和各种临床样品(包括组织检查、FFPE切片或少量细胞样品)都是基因表达分析和诊断的常见材料,但这些样品通常数量有限,质量不高,还没法进行第二次取样。所以得到足够RNA量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题,本公司根据Ribo-SPIA技术,开发了本产品。Ribo-SPIA技术的核心是利用DNA/RNA嵌合引物,以带polyA尾巴的mRNA为模板进行逆转录并得到双链cDNA、RNase H不间断地在cDNA第1链中的RNA部分产生裂口,DNA聚合酶以此裂口为基础进行链取代聚合反应,产生cDNA单链。
产品特点:
1.高效,能线性扩增1000-10000倍,能用5-100 ng总RNA模板扩增得到5μg左右的单链cDNA(扩增的cDNA主要来源于总RNA中的mRNA)。
2. 步骤简单方便,扩增在恒温进行,只需要4个小时,不需要特殊仪器设备。
3. 保真性好,保持RNA样品中各分子的相对丰度。
4. 尤其适用于RNA产量和质量都不高的样品。
5.扩增得到的单链cDNA能直接用于各种后续试验,包括qPCR、芯片分析、杂交反应等。
6. 本产品足够做10次双链cDNA的合成,20次SPIA扩增。
试剂盒组成:
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期为1年。
使用方法:
一:样品RNA的制备
本产品不含RNA相关试剂,用于Ribo-SPIA扩增的每个批次的RNA样品最好先做一个预实验。总RNA样品的浓度必须在1-20ng/μL,一次RIBO-SPIA所需总RNA的量为1ug。也可以使用mRNA,一次Ribo-SPIA所需总mRNA的量为5-100 ng。过低则需要浓缩,过高则需要用无RNase的水稀释。RNA必须经过DNase处理,不能含DNA污染。微量提取时不能使用核酸类的助沉剂。注意:本产品只能扩增含带polyA尾巴的RNA,不能扩增DNA和不含polyA尾巴的RNA。
二:一管式双链cDNA的合成
1.在0.5mL PCR管中,按下表配制双链cDNA合成反应。
注意:最好每次实验设置一个阴性对照组,在此对照中用超纯水替代自备的mRNA或总RNA:
三:SPIA扩增
2.在0.5mL PCR管中,按下表配制20μL的SPIA反应体系。注意:最好设置两个阴性对照组,在此两个对照中分别用超纯水替代SPIA引物和cDNA双链反应液。
四:SPIA扩增产物的检测
3. 取5μL SPIA扩增产物进行PAGE电泳检测。标准的反应结果是产生长度在200-2000bp之间的产物。
4. 如果产物将用于PCR定量,则可以不经过纯化直接使用,如果需要用于芯片杂交和浓度测定,则需要按常规的方法纯化cDNA以便去除残留的dNTP和引物。
5. OD检测纯度和浓度。在OD260的波长下测样品你给的光吸收。由于扩增产物是单链DNA,故1OD260=33ug/mL。
6. 所得DNA可以放-20℃长期放置。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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