供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 25次 |
货号: | ZY631042-25 |
CAS号: |
miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒
miRNA Realtime qRT-PCR Kit
本试剂盒采用在miRNA 3′末端加多聚A 尾的方法来使miRNA 具有Poly(A)尾,之后再使用Oligo(dT)-Tag引物进行逆转录反应,最终合成miRNA 对应的第一链cDNA。其反应流程如下:
本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光染料法的原理来进行miRNA荧光定量PCR检测。本产品是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂等所有PCR所需要的成分。miRNA qPCR Mix中所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合,使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中的Taq DNA polymerase是经化学修饰的高效热启动酶,配合独特的缓冲体系,使反应特异性更好,灵敏度更高,并能在更广的范围内对miRNA进行准确定量。
产品特点:
1. 简便、快捷完成miRNA的检测。
2. 检测通量高,只需最少的RNA样本,即可同时进行多种目标miRNA的检测。
3. 检测特异性好,独特的miRNA引物设计技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增、特别是Pre-miRNA的污染。
4. 检测分辨率高:该系统能分辨单碱基差异的miRNA。
5. 检测灵敏度高:可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA。
试剂盒组成:
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、miRNA cDNA第一链合成
请参见miRNA cDNA 第一链合成试剂盒产品使用说明书。
二、miRNA荧光定量检测
1.室温融化2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μm)。
2. 使用时请将2×miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合,避免起泡,并经短暂离心后使用。如果试剂没有混匀,其反应性能会有所下降。
3. 按照下表组分配制荧光定量PCR反应体系:
4. 建议反应程序设置如下:
注意事项:
1. miRNA 第一链cDNA的加入量不要超过Real time PCR 体积10%。
2. 对于特殊的检测体系,高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增,根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(稀释10倍或者100倍)。
3. 2×miRNA qPCR Mix中含有SYBR Green I和ROX染料,保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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