供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 20次 |
货号: | ZY630828-20 |
CAS号: |
DNA去磷酸化试剂盒
DNA Dephosphorylation Kit
分子克隆时,载体的自连极大降低了连接效率,而对载体DNA 两个5′端的-PO4基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。此外在进行DNA或RNA5′端标记前,也需要将其本来的-PO4基团去除再加上标记基团。本公司开发的DNA去磷酸化产品就是针对这一目的而开发。
产品特点:
1.基于细菌碱性磷酸酶,反应在较高温度进行,效率更高。
2. 把DNA和RNA 5′端的-PO4基团变成-OH基团,丧失连接能力。
3. 模板可以是单链,也可以是双链,既可以是DNA,也可以是RNA。
4.处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。
5. 本产品足够20次去磷酸化实验。
试剂盒组成
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期为6个月。
使用方法:
注意:dNTP和ATP 也是碱性磷酸酶的底物,所以如果核酸溶液中有dNTP和ATP,一定要先将其去除。否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶,降低DNA 去磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(50μL):
2、65℃反应30分钟。如果是RNA样品,建议在37℃反应30分钟。
3、酚氯仿抽提去除酶活性,乙醇沉淀DNA 待用(见附)。
附:酚/氯仿抽提DNA、乙醇沉淀浓缩DNA(本试剂盒不提供相关试剂,需要从本公司另购相关试剂,下列操作仅供参考):
1、在50μl DNA溶液中加入50μl超纯水增加体积,以免纯化过程中DNA 丢失。如果有必须,可以加入和4μL 核酸助沉剂提高回收效率。
2、加入100μL 酚/氯仿/异戊醇25:24:1 混合液震荡半分钟混匀,室温12000g离心3分钟,转移上清到新离心管中。
3、重复上步操作一次。
4、加0.1倍体积(即10μL)的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)。
5、再加入2.5倍体积(即250μL)的无水乙醇。
6、混匀后12000g 4℃离心10分钟,小心弃上清。
7、加入1mL 70%乙醇,短暂离心3分钟后小心弃上清。
8、短暂离心5秒,吸弃残留液体(约30-50μL)。
9、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA,立即使用或放-20℃长期保存。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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