供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 0.1mL*10 |
货号: | ZY640392-10 |
CAS号: |
酵母Y1HGold化学感受态细胞
Y1HGold Chemically Competent Cell
产品及特点 Y1HGold菌株是Clontech公司开发的GAL4-AbA酵母单杂系统用菌株,MATα型,可 直接转化质粒进行筛库试验。Transformation marker为:ura3,leu2;报告基因为: AbAr。Y1HGold-GAL4-AbA 酵母单杂系统需要两种质粒配套使用:pAbAi 和PGADT7。 质粒pAbAi的筛选标志为URA,用于表达 pBait-AbAi construct(1-3个bait DNA序列 重复串联后克隆到pAbAi中);质粒pGADT7的筛选标志为LEU,用于表达AD(GAL4 C 端768-881位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4-AbA酵母单杂系统原理: Aureobasidin A(AbA)是一种环酯肽抗生素,在低浓度(0.1-0.2 μg/mL)下即可对酵 母产生毒性。基因组中整合了pBait-AbAi的酵母菌株(Bait-Reporter Yeast Strains), 当猎物蛋白(Prey)结合到诱饵序列(Bait DNA)上,GAL4 AD就会激活AbAr的表达, 从而能够在含有抗生素AbA的培养基上生长。AbAr与营养缺陷报告基因相比具有更低背景 的优点,可以降低酵母单杂假阳性发生的概率。Y1HGold感受态细胞经特殊工艺制作, -80℃可保存三个月,pGADT7质粒检测转化效率>10 4 cfu/μg DNA。
Y1Hgold的基因型是:MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1。
运输及保存 感受态细胞干冰运输、-80℃保存,Carrier DNA -20℃保存;PEG/LiAc 4℃保存;有效
期半年。 自备试剂 目的 DNA、YPDA、 SD 培养基等
使用方法 1. 取 pBait-AbAi 质粒 5μg,BstBI 或 BbsI 酶切 1 小时,回收。
2. 取 100μL 冰上融化的 Y1HGold 感受态细胞,依次加入预冷的线性 pBait-AbAi 质粒1-5 μg(体积不高于 15 μL),Carrier DNA(95-100℃ 5 min,快速冰浴,重复一次)10μl,PEG/LiAc 500μL 并吸打几次混匀,30℃水浴 30 min(15 min 时翻转 6-8 次混匀)。
3. 将管放 42℃水浴 15 min(7.5 min 时翻转 6-8 次混匀)。
4. 5000 rpm 离心 40 s 弃上清,ddH2O 400μL 重悬,离心 30s 弃上清。
5. ddH2O 50μL 重悬,涂 SD/-Ura 平板,29℃培养 72 h。
6. 挑取 5-10 个克隆,用 PCR 方法确定 pBait-AbAi 整合到 Y1HGold 基因组中,PCR阳 性 菌 株 在 SD/-Ura 平 板 划 线 , 29 ℃ 培 养 72 h , 4 ℃ 保 存 , 此 菌 株 即是Y1HGold[Bait/AbAi] 菌株。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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