供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 500次 |
货号: | ZY60816-500 |
CAS号: |
超敏型BCA法蛋白定量试剂盒
Hypersensitive BCA Protein Assay Kit
本产品是在BCA法蛋白定量试剂盒(BTN80815)基础上改进的超敏蛋白定量试剂盒,尤其适合对低浓度的蛋白质溶液进行定量分析。
产品特点:
1.超敏感,最低检测浓度为0.5μg/mL。
2.线性范围在 0.5~20μg/mL,尤其适用于低浓度的样品。
3.对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感,但对Cu的还原剂和螯合剂敏感。
4.比 Lowry法更加简单快捷,45分钟内完成测定。
5.试剂稳定,室温可以放置两年,工作液1 天内有效。
6.终产物稳定,检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7.最短可以检测双肽,所以适合于分子量较小的蛋白质,而Bradford法需要一定大小的蛋白质。
试剂盒组成:
储存条件:常温运输和保存(但BSA 标准品需要低温运输,-20℃保存),有效期一年。
使用方法:(96板操作模式)
1.将本试剂盒提供的BSA标准品用自备的样品缓冲液稀释成浓度为0.04μg/uL的工作液待用(一次测试所需BSA标准品工作液的用量参见下表)。
2.取一块96孔板,先进行编号(编号可以根据样品数增加),并按照下表加入BSA工作液、待测样品和样品缓冲液:
3.计算 BCA工作液需要量:根据样品数量(包括制备标准曲线的样品的数量)和每个样品需要0.15mL BCA工作液的比例,计算所需BCA工作液的用量。
4.配制 BCA工作液:先将溶液A、溶液B和溶液C按50:48:2的比例混合,所得溶液即BCA工作液。比如:5mL溶液A + 4.8mL溶液B + 200μL溶液C。
5.将1倍体积(即150μL)的BCA工作液加入到各孔中并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96孔板放在振荡器上振荡30秒混匀。
6.60℃放置1小时。
7.冷至室温,10分钟内完成后续测定,否则化学反应还在继续进行,光吸收值会慢慢升高,每10分钟会升高2.5%左右。
8.在 562nm下比色测定其余样品的光吸收。如酶标仪没有562nm的设定,可用接近的波长检测,如570nm。
9.将编号为0 号的样品(对照)的读数从其余所有样品(包括0 号样品,其读数变成零)中扣除。
10.以0-7 号样品的BSA含量(μg,见上表最右行)为横坐标,以上一步得到的这几个样品的吸光值为纵坐标,绘出BSA的标准曲线。
11.再将待测样品的吸光值(减去0 号样品的读数后)标在标准曲线上,其在横坐标上对应的蛋白含量(μg)就是待测样品中的蛋白质含量,除以样品稀释液总体积(20μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/uL)。
注意事项:
1.加工作液后也可以在室温放置2小时,或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以,如果蛋白质浓度较低,可以改在60℃孵育60分钟。
2.待测样品浓度在20~2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
3.在一定浓度范围内BCA法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响:
4.本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响,所以需确保EDTA浓度不高于10mM,二硫苏糖醇不高于1mM,β-巯基乙醇不高于1mM,没有任何 EGTA,否则建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(BTN80815)。
5.本试剂受温度和时间影响较大,故需要准确定时和定温,以保证精确定量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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